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HLA:人白细胞抗原;HCT:造血细胞移植;DSA:供体特异性hla抗体;审计局:Single-antigen珠;MFI:平均荧光强度;PRA:反应性抗体

在需要造血细胞移植(HCT)[1]的患者中，使用人类白细胞抗原(HLA)-单倍同源相关供体越来越普遍。最近的研究表明，移植前受体血清中存在供体特异性hla抗体(DSA)与移植[2]不良有关。由于在单倍完全相同的HCT(单倍-HCT)中有大量的未共享的HLA位点，因此受体携带预先存在的DSA的几率是显著的。ci尿素等人[3]发现122例在单倍同卵移植前筛查的患者中有18%至少有一次DSA。与之前的研究一样，尽管有54.5%(12/22)的患者使用脱敏方案，但das的存在被发现是移植物失败的一个危险因素。因此，这些抗体的检测在供体选择中至关重要。此外，DSA检测的准确性对于在脱敏过程中监测这些抗体水平至关重要。目前，没有标准的dsa筛选程序。在这里，我们提出的证据，未经稀释的单抗原珠(SAB)检测不足以适当的检测das可能是由于补体干扰现象。

在过去的6年里，我们使用Bhamidipati等人[4]所描述的移植方案对102例单倍hct患者进行了抗hla抗体筛查。我们使用One Lambda的单抗原试剂盒对这些患者的血清进行了dsa筛选。在我们的机构中，2000年的平均荧光强度(MFI)作为临床相关抗体滴度的阳性临界值，基于我们对固体器官移植中固相免疫测定和细胞毒性交叉匹配[5]的相关性研究。使用美国卫生与公众服务部提供的在线工具计算出群体反应性抗体(PRA)。

其中59人(59%)被发现有抗hla抗体。16例(16%)患者共有37种抗体，根据供者HLA分型归类为dsa。表1总结了患者的人口统计资料。大多数患者为女性(88%)，诊断为AML(69%)。所有患者的中位随访时间为140天(范围:6-455)，幸存患者的中位随访时间为438天(范围:225-455)。在移植的患者中，中性粒细胞恢复的中位时间为16.5天(范围:14-78)。PRA评分均较高(中位数:97.5，范围:32-100)。

表1:单倍同卵造血细胞移植患者的供体特异性抗体。显示prozone效应的抗体用红色突出显示。简写:Diagnosis (Dx) Neutrophil engraft (NE)， overall survival (OS)， panel reactive antibody (PRA)， mean fluorescence intensity (MFI)。

我们随后对DSAs患者进行了系列稀释（1:25和1:50）和C1q测试。我们发现，在一部分抗体中，SAB测量的未稀释（或“纯”）MFI不能准确表示抗体强度。在检测到的27%（10/35）的DSA中，纯MFI明显低于1:25稀释血清的MFI（图1A）。在设置高抗体滴度时抑制基于抗体的分析是前酮效应的典型表现。Loiseau及其同事最近提出补体介导的前区效应可能会干扰HCT环境中DSA的检测，但据我们所知，这在文献[6]中尚未报道。

图1:A)dsa患者连续稀释的平均荧光强度(MFI)。单抗原珠(SAB)检测使用未稀释血清B)1:25稀释血清和C)C1q测试。这些相关性都不显著。在1:25稀释血清中C1q检测与SAB的相关性D)显著且强相关(决定系数= 0.692)。

在我们的人群中，我们发现针对I类抗原和II类抗原的抗体的prozone效应频率没有差异(95% C.I. 0.83- 13.9)。多重das的存在与任何特定抗体表现出prozone效应的可能性较高无关(RR: 2.1, 95% C.I. 0.32-14.0)。表现出prozone效应的dsa患者有显著的PRA评分(Wilcoxon Sum-Rank: p=0.04)。所有患者的PRA评分均不低于90%。根据C1q测试，所有证明prozone效应的抗体都是补体固定。因此，我们认为补体干扰是造成这一现象的原因。据肾移植报道，可能是由于补体激活产物[7]对抗IgG抗体与抗IgG二抗检测的损害所致。

图1B-C表明，未稀释SAB试验与1:25稀释（R2<0.001）和C1q试验（R2=0.019）的相关性较差。另一方面，观察到C1q和1:25稀释SAB试验之间存在高度关联（R2=0.69）（图1D）。同样，1:50稀释的SAB试验与1:25稀释（R2=0.97，p<0.001）和C1q试验（R2=0.58，p<0.001）高度相关（未显示数据）。所有这些二次测试提供了与未稀释SAB测试类似的补充信息。鉴于DSA检测的重要性和前区效应的高发病率，我们断言，单用未稀释的SAB检测不足以对单倍体HCT进行移植前筛查。作为这一现象的一个例子，我们想强调一例患者#3，我们发现该患者的DSA符合HLA B*57:01，由于前驱体效应，该患者最初未达到我们报告为阳性的阈值（MFI>2000）。该患者被纳入因其他DSA而进行系列稀释和C1q测试的组。该病例表明，仅依靠未稀释的SAB检测不仅可能低估抗体强度，而且可能完全错过相关的DSA。

根据本文提供的证据，我们认为未稀释的SAB测试不足以描述单倍体HCT环境中临床相关的DSA。此外，在我们的队列研究中，我们发现证明前区效应的抗体都是补体固定的。这种补体介导的前区效应可以简单地通过常规EDTA治疗来修复，而不会显著增加成本或额外测试。值得注意的是，我们目前的研究并不排除由过量抗体（ies）引起的传统非补体介导的前区效应。在肾移植环境中，Konvalinka及其同事[8]对经DTT预处理的血清进行连续稀释，消除补体干扰，然后在SAB分析中测试血清。他们发现一些抗体在DTT治疗中仍然显示出前酮效应，这表明其他非补体介导的抗体可能在导致读数错误下降中起作用。另一方面，与非补体结合抗体相比，我们研究中显示的显示补体介导的前区效应的抗体可能会增加移植物失败的风险[3]。

在其他情况下，已经推荐了几种不同的方法来消除SAB测试中的prozone效应。Tambour等人[9]建议在所有DSA筛分上进行至少两次连续稀释，以趋势抗体强度。其他研究探索了乙二胺四乙酸(EDTA)、二硫treitol (DDT)或热灭活的使用[10,11]。其中EDTA是最有希望的，但缺乏标准浓度使得文献难以解释。目前，在HCT环境中没有足够的证据来评价这些二次检测方法。

C1q检测或单一稀释筛查与未稀释SAB检测一起使用时提供了互补的信息，我们建议所有接受单倍hct的致敏患者采用这种方法，特别是PRA评分≥90%的患者。在这种情况下，还需要进一步研究个别方法的相对效力和成本效益。

的利益冲突

所有作者没有财务披露相关的研究在提交的手稿。作者声明没有利益冲突。

参考文献

1. ci尿素SO, Bayraktar UD(2014)没有捐赠者”?考虑一个单倍同卵移植。血Rev 29: 63-70。［Ref。］
2. Spellman S, Bray R, Rosen-Bronson S, hagenson M, Klein J，等(2010)在非亲属造血细胞移植受者中检测供者定向的hla特异性同种异体抗体可预测移植物失败。血115:2704 - 2708。［Ref。］
3. ci尿素SO, Thall PF, Milton DR, Barnes TH, Kongtim P, et al.(2015)造血干细胞移植中补体结合供体特异性抗体与原发性移植物衰竭的风险。生物血液移植21:1392-1398。［Ref。］
4. Bhamidipati PK、DiPersio JF、Stokerl Goldstein K、Rashidi A、Gao F等（2014）使用G-CSF动员的充满T细胞的PBSCs进行单倍体相合移植，并在非清髓性条件反射后进行移植后CY是安全的，并且与良好的结果相关。骨髓移植49:1124-1126。[Ref。］
5. Liu C, Wetter L, Pang S, Phelan DL, Mohanakumar T, et al. (2012) HLA抗体固相检测的截止值和数据处理:对胸部器官移植不可接受抗原的影响。Hum Immunol 73: 597-604。［Ref。］
6. Loiseau P, Amokhrane K, Visentin J, Kheav VD, Caillat-Zucman S，等。生物血液骨髓移植22:394-395。［Ref。］
7. Visentin J, Vigata M, Daburon S, contino - bordes C, FremeauxBacchi V, et al.(2014)利用流动珠检测抗人白细胞抗原抗体中补体干扰。移植98:625 - 631。［Ref。］
8. Konvalinka A, tinkam K (2015) HLA抗体检测在肾移植中的应用。J Am Soc Nephrol 26: 1489-1502。［Ref。］
9. Tambur AR, Herrera ND, Haarberg KM, Cusick MF, Gordon RA等(2015)评估抗体强度:MFI、C1q和滴度信息的比较。Am J Transplant 15: 2421-2430。［Ref。］
10. Schnaidt M, Weinstock C, Jurisic M, Schmid-Horch B, Ender A, et al.(2011)使用单抗原珠的HLA抗体规范- prozone效应的技术解决方案。移植92:510 - 515。［Ref。］
11. Schwaiger E, Wahrmann M, Bond G, Eskandary F, Bohmig GA(2014)补体成分C3激活:prozone现象影响单抗原珠HLA抗体检测的主要原因。移植97:1279 - 1285。［Ref。］

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文章类型:简短的沟通

引用:Zou J，Slade M，Romee R，Phelan D，Willey P，等。（2016）在单倍体相合造血细胞移植患者中，前酮现象使供体特异性抗体的检测复杂化。移植研究J 1（2）：doihttp://dx.doi. org/10.16966/2473-1730.108

版权:©2016 Zou J等人。这是一篇根据知识共享署名许可证条款发行的openaccess文章，允许在任何媒体中不受限制地使用、发行和复制，前提是原始作者和来源均已获得授权。

出版的历史:

收到日期:2016年10月6日

接受日期:2016年10月22日

发表日期:2016年10月28日