摘要

慢性髓系白血病(CML)是一种导致骨髓增生性母细胞不受控制生长的疾病。酪氨酸激酶抑制剂在晚期并不真正有用，而且有自己的副作用，反应和耐药性。迄今为止，CML只有通过骨髓移植(bone marrow transplantation, BMT)才能完全治愈，但骨髓移植有其自身的局限性，需要进一步研究以提高CML患者的生存率。我们在Jaslok医院的实验室一直致力于研究和特征间充质干细胞在各种类型的血液系统恶性肿瘤。我们提出了一种从CML患者外周血中分离和鉴定间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)的概念，可以结合骨髓移植在同一CML患者中使用。我们的研究表明CML患者外周血干细胞为BCR/ABL负．我们将该细胞系命名为“BCR/ABL”^负”细胞系。这些细胞的分子表征进一步证实了它们的间充质表型，具有不同的CD105，CD13和CD73基因的不同表达。有趣的是这些细胞还表达了多能基因，例如Oct4和Nanog和细胞因子I.e.eL6和TNFα。我们进一步证实了BCR / ABL的正常表型^负通过免疫荧光显微镜定位H-Ras、Rb、P53、P16、P21、EGFR和Ki67肿瘤相关蛋白在MSCs中的表达在体外转换试验。因此，我们认为这些正常的BCR/ABL负在不久的将来，从CML患者外周血中提取的MSCs可用于BMT手术之外的CML疾病更好的恢复。

关键词

慢性骨髓性白血病;间充质干细胞;BCR / ABL;多能细胞;分子标记;干细胞移植

介绍

慢性髓系白血病(Chronic Myeloid leukemia, CML)是骨髓系[1]的一种疾病。它几乎占所有成人白血病的15%。它导致被称为母细胞的白细胞不受控制和异常生长。疾病发展经历三个主要阶段，即慢性期、加速期和原细胞危象期，这取决于患者血液中原细胞的数量。如果患者不及早治疗，则病情分别进展到第二、第三、加速期和blast危象期[2]。这种进展背后的实际触发因素仍不清楚。但是，在大多数情况下，相互易位突变t[9:22]也被称为费城染色体导致酪氨酸激酶活性的组成性增加，这是由于BCR/ABL基因蛋白[3]的融合。这种融合基因的结构性表达是这种疾病的中心靶点。FDA已经批准了伊马替尼(Imatinib, ST1571，诺华Glivec)等药物，目前已被确定为CML的一线治疗药物，在大约大多数处于[4]初始阶段的患者中产生完全的细胞遗传学应答。类似的改善酪氨酸激酶抑制(TKI)机制的药物已经出现，但没有一个能够建立自己作为一个全面的治疗疗法。 Most of the TKIs have not been much effective on patients at advanced stages. Patients with certain point mutations are resistant to these treatments [5-7]. It is only effective to inhibit the TK activity but not effective in eradicating the cancer stem cell subpopulations [8]. At such a condition, Bone Marrow Transplant (BMT) remains as the only known cure for this disease [9] but, it also has its own limitations. Finding a suitable donor is one of the major problems in this therapy and patients also require crucial care to check graft vs. host reactions [10]. Hence, not all of the CML patients can be treated with allogeneic stem cell therapy, as it requires certain optimal conditions in patient’s body. This has provoked scientists since long to establish autologous stem cell therapy (ASCT) as a full curative measure. ASCT could be used for children, older aged patients and those suffering from advanced form of this disease. It does not trigger adverse graft reactions and hence can be widely used for a variety of patients.

本实验室一直致力于从多种恶性血液病中分离间充质干细胞在体外，显示出非恶性表型或无病基因[11]。最近，MSCs被认为是克服异基因造血干细胞移植相关问题的一种替代方法，可以将其与现有的治疗方法相结合[12-14]。因此，我们建议从CML阳性患者的外周血中分离间充质干细胞，并使用特定的分子标记对其进行表征，以了解其表型和性质。由于CML具有BCR/ABL基因融合的特点，我们考虑检测这些细胞的BCR/ABL转录本，并检测一些常见的致癌标志物。除了BCR/ABL外，我们还使用了其他一些致癌标记对这些分离的细胞进行了分析和表征，通过免疫荧光、RT-PCR分析和非锚固生长试验来检查它们的正常表型。如果它们被发现是正常的，没有任何异常，这些细胞可能与BMT一起用于更好地治疗这种疾病。

材料和方法

样品收集

根据印度孟买Jaslok医院和研究中心的伦理指南，采集CML患者的外周血(10ml)。德赢vwin首页网址采用Ficoll hypaque (Himedia, India)方法分离等量的细胞。抽吸中间层，转移到1.7 ml Eppendorf管中。4000 rpm离心10分钟，得到颗粒悬浮在1 ml RPMI培养基中，加入10%胎牛血清，0.2%谷氨酰胺，0.1%胰岛素和1% Pen Strep，得到单层细胞悬液，在65 mm Nunc中培养^®在37°C和5% CO下培养过夜₂在90%的CO湿度下₂孵化器。剩余血浆用于RNA提取，如下图所示。

CML患者外周血间充质干细胞的分离

细胞悬浮在上述生长培养基中，在37°C和5% CO下孵育₂在90%的湿度下₂孵化器如上所述。用1X PBS冲洗贴壁细胞，用含有10%胎牛血清、0.2%谷氨酰胺、0.1%胰岛素和1% Pen Strep的DMEM培养基喂养。这些细胞每天观察其生长，并使用相衬显微镜上的相机拍照。这些细胞在培养20天内融合。将融合细胞用0.25% PBS-Trypsin进行胰蛋白酶化，在几个65 mm的烧瓶中进一步扩增，然后将这些细胞在-85°C下冷冻，直到进一步实验。这些细胞的一部分被Trizol处理以提取RNA^®方法用于基因表达研究

相衬显微术

使用相位对比显微镜(Carl Zeiss Co.)观察细胞生长、增殖及外部形态特征，并借助附镜和TS视图软件逐步记录图像。观测是在20倍和40倍的放大倍数下进行的。

光学显微镜

复合光学显微镜下观察，1 × 10⁵每毫升细胞在无菌盖片上培养，直到达到亚融合水平。采用吉氏染色法研究和观察细胞的表型特征。盖玻片上的细胞用1XPBS洗涤，用50%甲醇固定10分钟。过滤过的Giemsa染色剂(Fischer Scientific)^®)染色约10分钟。用蒸馏水清洗多余的污渍，将盖玻片晾干，然后在20倍和40倍放大镜下观察。

免疫荧光显微镜

为制备用于免疫荧光的细胞，我们在无菌盖片上培养1 × 105细胞/ ml。细胞部分融合后，用阻断缓冲液浸泡约半小时，然后用4%多聚甲醛固定。我们选择了肿瘤细胞中常见的7种致癌抗体，即H-Ras、p53、Rb基因、Waf1、p16、EGFR和Ki-67。用1X PBS洗涤细胞后，加入1:10稀释的阻断缓冲液一抗，孵育2小时。采用FITC标记的山羊抗小鼠IgG作为普通二抗，在黑暗条件下与所有一抗一起，在1X PBS中稀释1:100。用1X PBS洗涤一抗后加入，避光孵育2小时。对盖片进行清洗、干燥，并将其倒置在带有安装介质的玻璃载玻片上，Fluromount (Sigma Aldrich, USA)。将盖片边缘用指甲油固定，然后在带有荧光附件的相衬显微镜下进行FITC激发观察，并拍摄并记录图像。

安克雷奇的独立分析

以0.8%琼脂糖溶液加入等体积含20%胎牛血清、2%戊strep和0.4%谷氨酰胺的倍强RPMI培养基，制得0.4%软凝胶混合物。将溶液冷却至40°C，并将各1.5 ml倒在35mm Nunc上^®文化菜肴。细胞的副汇集培养物用0.25％PBS-胰蛋白酶，并在上述生长培养基中制备单层细胞悬浮液，其密度为1×10⁴将该悬浮液倒在软琼脂分层培养皿中。用含10X胎牛血清、1% Penstrep、0.2%谷氨酰胺的rppmi 0.5 ml，每周2-3次，持续2周。两周后，观察细胞在琼脂平板上的菌落，并在相差显微镜下拍照记录。

分子标记

使用Trizol提取总RNA^®(Sigma Aldrich，美国)方法。2µg RNA用Applied Biosystems转录为cDNA^®高容量cDNA试剂盒。我们选择了各种标记物对该细胞系进行鉴定。本实验室曾报道过BCR/ABL、cd105、cd13、cd73、cd34、cd45、OCT 4、NANOG、SOX 2、LIF、Keratin 18、TNFα、IL 6、Dap激酶、EGFR和管家基因β Actin的引物序列和PCR条件[15,16]。此外,我们还为CML细胞异形3新标记即bcl - 2, cMyc Notch2, PCR条件共同对所有这三个基因从最初的变性在95°C 5分钟,其次是35周期在94°C 30秒,60°C 30秒和72°C 1分钟。这些基因的引物序列描述如下(表1)。

结果

CML患者外周血贴壁细胞的分离

我们早些时候在此稿件中描述了关于癌症患者衍生的干细胞的培养。发现来自CML患者外周血的一些Ficoll分离的悬浮细胞被发现在培养的2-3天内粘附到培养皿的底部，如图1A所示。然后，这些细胞在培养的20-30天内非常快速地增殖并且达到汇合，如图1B所示。汇合后，将这些细胞用0.25％PBS-胰蛋白酶进行胰蛋白酶，并悬浮在新鲜的生长培养基中，最初在尼坦植物上镀膜^®35毫米培养皿进一步生长。在达到融合后，这些细胞通过重复胰酶化过程产生进一步的传代。在随后的传代中，观察到部分细胞形成多能克隆，如图1c所示。因此，一个稳定的细胞系被发展和在许多传代生长。然后对这些细胞进行表型和基因型表征，以更好地了解它们的细胞和分子特征。

染色染色

采用吉氏染色法观察细胞表型特征。在细胞核周围观察到纤维状的网状结构，将细胞核与细胞质连接起来。大多数细胞伸长，细胞核内有2 ~ 3个核仁。有些细胞细长而小，而有些则非常大而分散。部分细胞可见大量细小丝状伪足，高倍镜下观察可见。图1d为这些细胞的Giemsa染色图。

图1A-1D：它显示了由CML患者的外周血细胞开发的MSCS细胞系的相位和光显微照片。图1A显示在该培养物的第5天的粘附细胞，图1B显示出良好的汇合细胞图1C显示10次通道和图D后获得的多能性克隆显示Giemsa染色细胞具有细长形态的染色细胞

CML患者分离干细胞中BCR/ABL基因的表达

分子标记分析是为了找出某些相关基因的存在或缺失，以帮助揭示这些细胞的遗传特征。BCR/ABL是[9:22]易位产生的融合基因。因此，识别该基因的存在对于CML患者的细胞来源至关重要。图2显示了BCR/ABL基因在被称为“在活的有机体内细胞和培养出来的细胞被称为在体外"第3和第4通道的细胞。可见BCR/ABL基因存在于血浆细胞(体内细胞)中，但在两种细胞系中均不存在(体外)表明这些细胞在没有BCR/ABL融合蛋白的情况下生长。因此，我们将这些细胞命名为BCR/ ABL^负并对它们进行了进一步的表征。

不依赖锚定生长试验

研究主要采用锚定独立或软琼脂法在体外培养细胞的转化。图3显示了BCR/ABL的单独检测^负细胞。可以清楚地看到,这些细胞形成很少锚地独立殖民地年底第二周表明这些细胞正常表现型由我们的研究进一步证实了癌症分子标记/ RT PCR和免疫荧光显微镜。

BCR/ABL中间充质和造血标记物的表达^负细胞系

干细胞可以使用特定的分子标记来表征其间充质和造血表型。图4显示了BCR/ABL中间充质和造血标记物的表达^负细胞早期传代P4。的BCR / ABL^负CD105、CD13和CD73基因的表达表明CML患者的间质表型在活的有机体内细胞仅显示CD 105的存在，并且不存在CD13和CD73基因。这种缺席的原因是未知的。还有人看到bcr / abl^负细胞在传代早期轻度表达CD34基因，多传代后减少。这些细胞不表达CD45基因，而CD45基因是造血细胞的另一个重要基因标记。因此，在BCR/ABL中缺失cd45基因^负细胞证实其间充质表型。因此，我们可以确认BCR/ABL^负细胞为来自CML患者外周血的间充质干细胞，在早期传代时CD34基因轻度表达，在培养中多次传代后一般消失。

图2:CML患者BCR-ABL基因在“体内”细胞中表达，而在“体外”细胞中不表达。

图3:它显示了BCR / ABL-VE细胞的锚固型独立生长测定（软琼脂测定）。甚至在镀这些细胞2周后，在软琼脂测定中没有发现适当的菌落。

图4:显示BCR/ABL-ve细胞和CML患者血浆细胞(即体内细胞)的间充质(CD105、CD13、CD73)和造血(CD34、CD45)标记物。

BCR/ABL中多能性标记物的表达^负细胞系

多能性是干细胞的特性之一。图5显示了Oct4、Nanog和Sox 2基因在BCR/ABL中的表达^负和CML患者的血细胞(在活的有机体内）.这里显示了两者在活的有机体内CML患者的细胞以及BCR / ABL负OCT4和Nanog基因的表达证实了它们的多能性。

BCR/ABL中分化标志物的表达^负细胞系

分化是一个阶段，干细胞决定自己成为一个特定的表型。图6显示了在CML细胞和BCR/ABL体内均存在LIF和角蛋白的分化标志物^负表示BCR / ABL的细胞^负细胞在培养过程中保持未分化和表皮状态在活的有机体内．LIF主要有助于保持无差异地位;角蛋白的表达表明了这些细胞的表皮特征。

细胞因子标记物在BCR/ABL中的表达^负细胞系

细胞因子是许多疾病条件的预后标志物。图7显示了两者中TNFα和IL6的表达在活的有机体内和BCR / ABL^负细胞。结果表明，TNFα在两种细胞中均有表达，而IL6仅在BCR/ABL中表达^负在CML患者体内细胞中缺失。

BCR / ABL中各种致癌标志物的表达^负细胞系

由于我们的目标是将这些细胞与BMT一起用于移植目的，我们需要检查这个BCR/ABL^负任何致癌异常的细胞系都是通过以前的疾病细胞存在的。为了证实这一点，我们选择了特定的致癌标志物，如Dap激酶、Bcl2、Notch、cMyc和EGFR基因。图8显示了用于分析BCR/ABL的各种致癌标志物的结果^负通过3（p3）和通道4（p4）的细胞。观察到Dap激酶，Bcl2和Notch2基因在体内和BCR / ABL中存在^负而cMyc和EGFR在体内和BCR/ABL均缺失^负细胞表明其正常表型并且没有任何致癌异常。因此这个bcr / abl^负细胞可与BMT工艺一起用于移植计划，以更好地治疗这种疾病。

免疫荧光显微镜定位了BCR/ABL中的致癌标记^负细胞系

免疫荧光是一种用于识别给定细胞中蛋白质的存在和定位的工具。我们研究了BCR/ABL中特异性致癌、抑癌、核仁和表面受体蛋白的定位^负用免疫荧光显微镜检查细胞的正常表型

图9A显示H-Rasoncoprotein在大多数BCR/ABL中表达^负细胞胞浆。同样，所有的肿瘤抑制蛋白如p53、Rb、p16和p21在几乎所有这些细胞中都存在。p53在整个细胞结构中都可以观察到，如图9C所示，p53存在于细胞核和细胞质区域。视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)和p16基因仅在核区存在，分别见图9B和9E。p16染色细胞核未染色，其余细胞核染色明显。然而，p21蛋白被发现存在于细胞核以下的一些类似细胞器的结构中(图9d)。

图5:在BCR/ABL-ve细胞和CML患者的血细胞中显示多能基因OCT4、NANAOG和SOX2

图6:在BCR/ ABL-ve细胞和CML患者血细胞中显示分化标志物、LIF和角蛋白

图7:在BCR/ABL-ve细胞和CML患者的血细胞中显示细胞因子标志物、il - 6、TNFα和角蛋白

极少数细胞表现出Ki- 67和EGFR抗原的荧光。Ki-67仅存在于核仁中，如图10A所示，而EGFR在BCR/ ABL中不存在^负单元格如图10B所示。

因此，整体免疫荧光研究证实BCR/ABL表型正常^负因此，在不久的将来，这些细胞可以用于与BMT联合移植的研究，以治疗该病。

讨论

慢性髓系白血病是干细胞的一种进行性疾病，在原始危象期唯一的治疗方法是骨髓移植，需要HLA匹配的异体供体进行造血干细胞移植。在这种情况下，它的可用性和移植相关的并发症使它成为一个棘手的程序。因此，这种疾病和其他许多疾病仍在等待一个理想的、副作用最小的治疗方法。MSCs被认为是包括血液系统恶性肿瘤在内的许多疾病的新治疗药物[12-14]。骨髓间充质干细胞与脐带干细胞或造血干细胞共移植已取得积极结果。选择MSCs进行自体或异体移植最大的好处是减少或完全避免移植物对宿主的反应。它们也被认为可以提高造血移植的效率。因此，我们将我们的研究引导到CML患者外周血中培养MSCs，并通过RT/PCT和免疫荧光显微镜使用各种生物标志物对其进行正常表型的表征。

我们在Jaslok医院的实验室和研究中心一直致力于从许多癌症肿瘤和血液系统恶性肿瘤[11]中分离、鉴定和培养干细胞。我们考虑从CML患者中分离干细胞，并研究其表型特征和分子机制，以确定这些干细胞是否足够安全，可以联合BMT用于自体干细胞移植。我们进一步评估了这些干细胞是否存在BCR/ABL转录本，我们发现从CML患者中分离和生长的细胞是BCR/ABL^负细胞，因此我们将这些细胞指定为BCR / ABL^负细胞系。Carrara et al.[17]也进行了类似的研究，我们得到的结果与他们一致。建立BCR/ABL^负通过对比显微镜和Giemsa染色的表型观察，我们可以逐渐缩小到间充质干细胞存在的想法。为了重申这一观点，我们对这些细胞进行了特定的干细胞标记，证实了我们的猜想。这些表达CD105、CD13和CD73的细胞的分子图谱证实了这些细胞的间充质特征。OCT4和NANOG活性表明[15]细胞具有多能性。LIF的表达表明这些细胞处于未分化状态，而明确表达的角蛋白则用于鉴定细胞[15]的上皮性质。然而，在这些通常被认为是MSCs阴性标记的细胞中也发现了CD34的表达。在我们的研究中，我们检测到了早期传代细胞中CD34的表达，因此我们得到了这些细胞中CD34的弱表达。然而，另一种造血细胞标志物CD45在这些细胞中完全缺失，提示BCR/ABL^负细胞仅为间充质干细胞。在BCR/ABL中可见CD34表达^负再传代几次后细胞可能消失。Lin et al.[18]报道了CD34基因的减少。这可以用之前的一些发现来解释，外周血源细胞可能存在cd34，也表明它们是血管系统的一部分。CD34⁺MSCs也有报道显示大量的丝状伪足，CD34存在于这些丝状伪足的顶端，促进血管生成。在上述结果中，观察到一些细胞中有大量丝状伪足，这可能支持CD34的存在⁺骨髓间充质干细胞。此外，在外周血源间充质干细胞的早期传代中，有报道称CD34的存在较弱，在随后的传代中迅速减少。由于我们只评估了早期传代，因此有可能观察到轻度CD34的存在[19-21]。大量的IL-6，因此，如果考虑自体移植联合BMT治疗CML，这是一个额外的优势。TNFα和Bcl-2表达正常，表明BCR/ABL表型正常^负细胞。

图8:在BCR/ABL-ve细胞和CML患者的血细胞中显示了致癌标志物DAPK、BCL2、cMYC、EGFR和NOTCH2。

图9:免疫荧光显微镜显示BCR-ABL-ve细胞中有A) HRas, B) Rb, C) P53, D) p21和E) p16癌蛋白

图10:免疫荧光显微镜显示了A) Ki67和B) EGFR癌蛋白在BCR-ABL-ve细胞中

我们进一步使用了一些致癌标记和在活的有机体内移植实验再次证实这些细胞的正常表型。我们选择了Dap Kinase、Bcl-2、cMyc、EFGR和NOTCH2等5种致癌标志物，通过RT/PCR分析确定它们在这些细胞中是否存在。Dap激酶是一种潜在的肿瘤抑制基因，缺乏该基因有利于细胞生长形成肿瘤[22]。我们的细胞显示了Dap激酶基因，明确表明BCR/ ABL的正常表型^负细胞。有报道称cMyc的高表达导致癌基因[23]的表达加重。我们的细胞显示出癌基因cMyc的缺失，再次显示为正常类型。Notch2信号通路的失调可能是许多类型血液病[24]的主要事件。放松管制常常导致该基因表达的减少。我们的BCR / ABL^负细胞表现出Notch2，这也是正常细胞的特征。EGFR是一种细胞表面受体，属于EGF家族。也有报道在某些情况下，增加EGFR的表达，促进癌细胞转移的能力，因此许多药物专注于下调EGFR，以控制癌症[25]。的BCR / ABL^负细胞中EGFR无表达，表明BCR/ABL表型正常^负细胞。我们知道EGFR在CML的病因中没有作用，但我们从CML患者外周血中分离出的MSCs中检查了这种表达，只是为了检查这些细胞中这个重要的致癌基因。最近，我们发现许多间充质干细胞在培养过程中分泌Il-6细胞因子[11]。在我们的研究中，BCR/ABL^负间充质干细胞分泌大量的IL-6，因此考虑自体移植联合BMT治疗CML有额外的优势。TNFα和Bcl-2表达正常，表明BCR/ABL表型正常^负细胞。

我们还进行了免疫荧光检测某些致癌蛋白的存在和缺失，以确定BCR/ABL的正常表型^负细胞。在这项研究中，我们观察了很少的BCR / ABL^负细胞显示EGFR蛋白，从而表明正常表型。类似地，H-Ras，几乎所有BCR / ABL中存在致癌标记物^负细胞。H-Ras基因与Waf1的高表达可抑制K562细胞的增殖在体外．BCR / ABL^负细胞已经显示出这两种基因的存在，这有助于支持这些细胞的正常表型[26,27]。P53是一种众所周知的肿瘤抑制基因，常受BCR/ABL活性[28]的下调。由于在这些细胞中未检测到BCR/ABL，因此可以预期在细胞中观察到该蛋白的存在。正如我们所期望的，几乎所有这些细胞在整个细胞及其细胞核中都显示出明亮而明显的p53。在某些病例中，p53基因的恢复可以启动白血病细胞的凋亡，并增加正常类型细胞的增殖。我们还研究了Rb蛋白在BCR/ABL-ve细胞中的表达。Rb基因是另一种参与肿瘤发生发展的抑癌基因。有报道称Rb基因功能异常可能是血液系统恶性肿瘤的原因，[29]基因缺失也有报道。我们的研究表明Rb基因在BCR/ABL中表达^负细胞。另一个肿瘤抑制基因p16是由p53基因紧密控制的。它促进细胞衰老，因此对许多类型的肿瘤细胞是致命的。我们的细胞中p16的存在表明正常的凋亡信号，这是正常细胞的另一个特征。我们还研究了p53控制的waf1基因的表达。参与抗凋亡途径[31]。它明显地定位于细胞核下方的细胞质内的细胞器状结构。综上所述，免疫荧光研究明确表明BCR/ABL正常^负该细胞系可作为BMT治疗慢性粒细胞白血病的附加治疗手段。

通过这些实验收集的数据表明，这些细胞很可能是正常的，而且似乎在任何方面都不令人讨厌，尽管它们来自于CML的原始危象患者。这些获得正常间充质干细胞的结果与之前从CML患者[17]中分离出正常间充质干细胞的研究一致。许多研究都指向使用间充质干细胞治疗CML。据Zhao Z[31]的一项研究报道，它们支持造血作用。它们也被证明可以缓解GHVD, GHVD是造血干细胞移植中的一个普遍问题。MSCs用于共移植时，在支持临床使用[20]的患者中表现出更好的缓解。MSCs在CML患者[32]中具有免疫调节作用。Koc和Lazarus[12]解释了MSCs移植在许多疾病中的强大潜力。最近在美国举行的血液学与血液疾病国际会议上，Farid[14]赞同MSCs可与造血干细胞共同移植治疗CML的观点。使用MSCs共移植在患者中显示了更好和更快的缓解以及造血再生[12-14]。 Hence, MSCs whether allogeneic or autologous, do have strong therapeutic potentials for treating this disorder in addition to BMT. There is a need to generate rigorous amount of data with large sample size and a robust biological marker profile in this area of work to come to final conclusion in using MSCs derived from CML patient’s peripheral blood can be used in combination with BMT to cure this disease without much side effect. We hope that this success will give great relief to CML suffering patients in near future.

致谢

作者希望感谢Jaslok医院的管理层资助这个干细胞研究项目编号491和Jacob Texy先生在这项研究期间的技术帮助。

参考文献

1. 费城染色体的遗产。J clinj Invest 117: 2030-2032。［Ref。］
2. 索耶斯(1999)慢性髓系白血病。中国医学杂志341:1330-1340。［Ref。］
3. 信:一种新的一致的染色体异常在慢性髓系白血病阿quinacrine荧光和Giemsa染色鉴定。性质1:290 - 293。［Ref。］
4. (1)一种BCR/ABL酪氨酸激酶特异性抑制剂在罗氏病中的疗效和安全性。一种新的一致性染色体异常——慢性髓系白血病。N Engl J Med 344: 1031-1037。［Ref。］
5. Kantarjian H，Giles F，Wunderle L，Bhalla K，O'Brien S等人。（2006）Imatinib抗性CML和费城染色体的NILOTINIB。n Engl J Med 354：2542-2551。［Ref。］
6. Hughes T, Deininger M, Hochhaus A, Branford S, Radich J，等(2006)监测对酪氨酸激酶抑制剂治疗反应的CML患者:审查和建议统一目前检测BCR/ABL转录本和激酶结构域突变和表达结果的方法。血108:28-37。［Ref。］
7. (2007)慢性髓系白血病中BCR/ABL激酶结构域突变的动态变化。血110:4005 - 4011。
8. Chomel JC, Bonnet ML, Sorel N, Bertrand A, Meunier MC, et al.(2001)慢性髓系白血病患者持续存在不可检测的分子残留疾病的白血病干细胞持续性。血118:3657 - 3660。［Ref。］
9. 高盛JM，Apperley JF，Jones L，Marcus R，Goolden Awg等人。（1986）慢性骨髓白血病患者的骨髓移植。n Engl J Med 314：202-207。［Ref。］
10. Potdar Pd，SubeDi Rp（2011）定义来自急性淋巴细胞白血病患者外周血的间充质和造血干细胞的分子表型进行再生干细胞疗法。J干细胞Regen Med 7：29-40。［Ref。］
11. Koç ON, Lazarus HM(2001)间充质干细胞:走向临床。骨髓移植27:235-239。［Ref。］
12. Kim EJ, Kim N, Cho SG(2013)间充质干细胞在造血干细胞移植中的潜在应用。Exp Mol Med 45: e2。［Ref。］
13. Farid RJ（2013）来自慢性髓性白血病患者的骨髓衍生间充质干细胞的分子和功能性。美国血液学和血液障碍国际会议的诉讼程序。［Ref。］
14. Potdar P, Sutar J(2010)人内脏和皮下脂肪组织间充质干细胞系的建立和分子特性研究。J Stem Cells Regen Med 6: 26-35。［Ref。］
15. Potdar P, Sutar J(2010)人内脏和皮下脂肪组织间充质干细胞系的建立和分子特性研究。J Stem Cells Regen Med 6: 26-35。［Ref。］
16. Potdar PD, Deshpande S, Chagule S(2013)囊性水瘤细胞系的开发和分子特性研究在体外模型系统研究幼童水瘤的进展。PRIJ 2013: 1-13。［Ref。］
17. Carrara RCV, Orellana MD, Fontes AM, Palma PVB, Kashima S, et al.(2007)同种异体骨髓移植后来自慢性髓系白血病患者的间充质干细胞不表达BCR-ABL，且无嵌合现象。巴西医学生物学杂志2007:57-67。［Ref。］
18. Lin CS, Ning H, Lin G, Lue TF (2012) CD34是否真的是间充质基质细胞的阴性标记物?Cytotherapy 14: 1159 - 1163。［Ref。］
19. 张Y，柴C，江XS，Teoh Sh，梁坤（2012）脐血血液CD34 +细胞与人间充质干细胞的共同培养。组织ENG12：2161-2170。［Ref。］
20. 吴涛，白华，王春波，张强，谭太利夫，等。(2009)自体骨髓间充质干细胞与外周血干细胞联合移植治疗血液学恶性疾病。中华内科杂志48:392-395。［Ref。］
21. 熊yy，风扇q，黄f，张y，王y等。（2014）间充质干细胞与间充质干细胞与脐带血合并植入自体造血干细胞移植后植入失效：试验前瞻性，开放标签，随机试验。Biol血髓移植20：236-242。［Ref。］
22. 死亡相关蛋白激酶:从凋亡调控到抑瘤功能和B细胞恶性肿瘤。细胞凋亡7:261 - 270。［Ref。］
23. Nakamura S, Yokota D, Tan L, Nagata Y, Takemura T, et al. (2011) BCR ABL下调thanatos相关蛋白11通过c-Myc表达促进CML细胞增殖。Int J Cancer 130: 1046-1059。［Ref。］
24. Rice KN, Jamieson CH (2005) CML干细胞的分子通路。Int J Hematol 91: 748-752。［Ref。］
25. 孙建忠，卢勇，徐勇，刘芳，李芳琴，等。(2012)表皮生长因子受体在精巢骨髓性白血病中的表达与临床预后相关。红细胞色素30:89-97。［Ref。］
26. Delgado MD, Vaqué JP, Arozarena I, López-Ilasaca MA, Martínez C, et . (2000) H-， K-和N-Ras通过p21waf1依赖机制抑制髓系白血病细胞增殖。致癌基因19:783 - 790。［Ref。］
27. Steinman RA, Huang J, Yaroslavskiy B, Goff JP, Bvall ED等(1998)正常髓系分化过程中p21 (WAF1)表达的调控。血91:4531 - 4542。［Ref。］
28. Li L, Wang L, Li L, Wang Z, Ho Y, et al.(2012)联合imatinib对CML白血病干细胞的抑制作用。癌细胞21:266-281。［Ref。］
29. Towatari M, Adachi K, Kato H, Saito H(1991)人视网膜母细胞瘤基因产物在慢性粒细胞白血病巨核细胞危象中的缺失。血7:2178 - 2181。［Ref。］
30. Hernandez-Boluda JC, Cervantes F, Colomer D, Vela MC, Costa D, et al.(2003)慢性髓系白血病进展到囊胚危象中的基因组p16异常:一项对42例患者的连续研究。Exp血醇31:204-210。［Ref。］
31. 赵Z，唐x，你，李文，刘f等。（2006）评估骨髓间充质干细胞生物学特性及慢性髓性白血病患者的血红酸功能。Leuk Res 30：993-1003。［Ref。］
32. 西山Z，广宇A，宇光S，Hongmei Z（2011）慢性髓性白血病患者间充质干细胞免疫调制缺陷研究。J Exp Clin Cancer Res 30：47。[Ref。］

在此下载临时PDF

条信息

文章类型:研究文章

引用:Potdar PD, Lotey NK(2015)慢性髓系白血病(CML)外周血中BCR-ABL-ve间充质干细胞的分离、鉴定及其在提高CML患者骨髓移植潜能中的应用。Int J干细胞Res 1(1): doi http://dx.doi.org/10.16966/2472-6990.101

版权:©2015 Potdar PD等。这是一篇开放获取的文章，在知识共享署名许可协议的条款下发布，该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制，前提是注明原作者和来源。

出版的历史:

收到日期:2015年5月04

接受日期:2015年6月5日,

发表日期:6月12日,2015