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研究文章
大肠菌群的流行，耐抗生素大肠菌群和大肠杆菌埃及生乳和几种生乳干酪的血清型

Abd El rahman M Elbagory＊1艾哈迈德·M Hammad1Alzahraa2马Shiha2

1埃及萨达特市兽医大学动物医学院食品卫生与控制系
2Menofia大学医院，Shibin Elkom，埃及

*通讯作者：Abd El rahman M Elbagory，埃及萨达特市兽医大学动物医学院食品卫生与控制系，E-mail: Elbagory200@yahoo.com


摘要

本研究调查了大肠菌群、耐抗生素大肠菌群和大肠杆菌埃及生乳和一些生乳干酪品种的血清型。对从埃及El Minofia省不同地区采集的120份生乳和白色软干酪（盐渍和无盐）和硬干酪（Ras）样本进行了检测。结果表明，大肠菌群成员包括大肠杆菌,枸橼酸杆菌属diversus,弗氏梭菌、产气肠杆菌、凝集大肠杆菌、泄殖腔大肠杆菌、肺炎克雷伯菌小种属和肺炎克雷伯菌sub. spp。肺炎以不同比例从检验样本中分离出来。采用柯比-鲍尔纸片扩散法检测细菌对氯霉素、伊培南、舒巴坦+头孢哌酮、氨苄西林+舒巴坦、阿莫西林+克拉维酸、头孢噻肟、庆大霉素、阿米卡星、头孢哌酮、四环素等10种抗菌药物的敏感性。部分菌株表现为多药耐药表型。此前检测的大肠菌群菌株依次显示对AMC有耐药性;山姆& amc;Amc & CFP;AMC、TE、C、AMC、CFP、TE均表现出对其他被试抗生素的敏感性。孤立的大肠杆菌5种血清型;O111: K58(B9肠出血性大肠杆菌,阿124：K72(B17) EIEC O119：K69(B19) EPEC、阿55: k59(B5) EPEC和非分型菌株。总之，这项研究提供了埃及生奶奶酪中大肠菌群发生率的有意义的数据，并仅仅强调了在埃及制备生奶奶酪时需要实施严格的卫生措施。本研究中发现的最令人担忧的趋势是对抗生素耐药性和潜在产毒的测定大肠杆菌菌株。这一发现使对大肠菌群的持续监测成为一项高度优先事项，以确定食品生产中出现的有害菌株。

关键字

大肠杆菌群;抗生素耐药大肠杆菌群;大肠杆菌血清型;奶酪

介绍

虽然牛奶具有优异的营养品质，但它也是食物传播病原体的有效载体，这些病原体对人类健康构成严重威胁，并构成了所有乳制品相关疾病的90%[1]。大肠杆菌群特别大肠杆菌常用于食品微生物分析，作为卫生条件差的指标。此外，大肠菌群检测是用来衡量乳品微生物污染最小化操作规程的质量，也是HACCP体系中被认可的安全指标[2,3]。大肠杆菌污染奶酪，特别是粪便大肠杆菌表明直接或间接的粪便污染，并被认为是在加工和销售[4]过程中忽视众多卫生规则的一面镜子。一些大肠菌群的成员对牛奶及其产品中令人反感的污染的发展负有责任，使其质量低劣，甚至无法销售，而且某些血清型大肠杆菌与胃肠炎和食物中毒暴发有关[2]。

耐抗生素大肠菌群在世界范围内不断增加，导致人类传染病治疗的失败，它们是人类和动物抗感染治疗中的一个主要问题。此外，在世界范围内，大肠菌群对抗生素的耐药性具有生物学上的危险，增加了动物和人类的疾病，因此，大肠菌群被认为是危害健康、社会和经济的问题。因此，本研究拟对大肠菌群进行分离鉴定，对分离的大肠菌群进行血清分型大肠杆菌以及对分离大肠菌群不同成员的抗生素耐药性的测定。

材料和方法
收集和准备奶酪样品

120个样品;从埃及Menofia省不同地方的乳品店收集30份生牛奶、白盐软奶酪、白无盐软奶酪和Ras奶酪，各装在干净的无菌聚乙烯袋中，并在最短时间内将其冷藏到实验室进行检查。将每一份干酪样品彻底捣碎，然后从每一份准备好的样品中提取25克加入225毫升2%的柠檬酸钠中，彻底搅拌至完全乳化。

大肠菌群的分离鉴定

采用APHA[6]记录的技术从制备的原料奶和制备的奶酪样品中分离大肠菌群。根据Holt et al.[7]的方法，对分离纯化的大肠菌群进行形态学和生化鉴定。

血清学鉴定大肠杆菌隔离[4]

采用Denka Seiken公司生产的多价和相应的单价抗血清对分离的大肠杆菌进行血清学鉴定。日本Oxoid ltd .)在两个不同滴无菌蒸馏水被放在一个干净的载玻片和怀疑的殖民地文化的一部分与无菌循环乳化在每一滴无菌蒸馏水在幻灯片上给一个平滑的相当密集悬挂。然后，在其中一个悬浮液中加入1滴无菌蒸馏水混合作阴性对照，在另一个悬浮液中加入1滴多价抗血清，前后倾倒1分钟。当与一组多价血清发生强烈阳性凝集时，观察到凝集作用。将菌落的另一部分接种到倾斜的营养琼脂中，并进一步培养以获得用于单价血清检测的培养物。将各坡体培养物重悬于蒸馏水中，用O和K血清进行玻片凝集试验，鉴定O和K抗原。大肠杆菌多价2、3、4和大肠杆菌单价抗血清;O26: K60 (B6)， O44: K74 (B-)， O55: K59 (B5)， O78: K80 (B) O86: K (B7)， O11: K58 (B9)， O112: K66 (B1)， O114: K9, O119: K69 (B19)， O124: K72 (B17)， O125: K70 (B15)， O126: K71 (B16)， O127: K63 (B8)， O128: K67 (B12)， O142: k86和O157:H7被使用。

某些分离大肠菌群的抗生素图

根据临床和实验室标准研究所[8]的指南，通过纸片扩散法测试特征菌株对10种抗菌药物的敏感性。测试的抗菌药物为氯霉素（30µg）、英培南（10µg）、舒巴坦+头孢哌酮（105）µg、氨苄西林+舒巴坦（20µg），阿莫西林+克拉维酸（30µg）、头孢噻肟（30µg）、德赢vwin首页网址庆大霉素（10µg）、丁胺卡那霉素（30µg）、头孢哌酮（75µg）和四环素（30µg）。然后根据CLSI将单个抗菌剂的区域直径转换为敏感、中间和耐药类别[8]。

讨论
分离大肠菌群

图1数据显示，检测的生奶样品中分离大肠菌群的发生率为大肠杆菌(7/30, 23.33%),枸橼酸杆菌属diversus(7/30, 23.33%),c . freundii(8/30, 26.67%),肠杆菌属aerogenes(7/30, 23.33%),E.凝聚体(3/30, 10%),大肠下水道肺炎克雷伯氏菌(4/30,13.35%)、肺炎克雷伯氏菌(6/30,20%)k .肺炎肺炎(4/30 13.33%)。而盐渍白软干酪样品中分离出的大肠菌群为大肠杆菌(4/30, 13.3%)、异柠檬酸杆菌(4/30,13.3%)、弗氏杆菌(6/30,20%)、产气肠杆菌(4/30,13.33%)、E.凝聚体(2/30, 6.67%),大肠下水道(6/30, 20%),肺炎克雷伯菌sub. spp。奥扎尼(3/30, 10%)和肺炎克雷伯菌(6/30,20%)。大肠杆菌群以外的大肠杆菌可以被Digrak & Ozcelik和Amer等人以不同比例分离出来[9,10]。的发病率大肠杆菌证实了Nichols等人和El-Gamal & Abdel-Khalek的记录[11,12]。已经证明k . pnumoniae是肺炎、败血症、尿路和软组织感染等医院感染的重要原因[13,14]。据报道，K. oxytoca是肠毒素产生微生物，可引起抗生素相关性出血性结肠炎[15]。肠杆菌属的一些种大肠zakazakii，与其他肠道生物不同，可能导致新生儿的高度致死性菌血症和脑膜炎综合征，并伴有中枢神经受累[16]此外，志贺菌样毒素基因水平转移到一些柠檬酸杆菌属物种，如导致德国学龄儿童爆发的弗氏梭状芽孢杆菌，进一步突出了大肠菌群的公共卫生重要性[17].图1中的数据表明，所检查的无盐软奶酪中分离大肠菌群的发生率为大肠杆菌(4/30, 13.3%)、diversus(5/30, 16.67%)、c . freundii(7/30, 23.33%), e . aerogenes (6/30, 20%), e . agglomerans (2/30, 6.67%), e .泄殖腔(2/30,6.67%),k .肺炎sub. spp。奥扎尼(5/30, 16.67%)和肺炎克氏杆菌。肺炎(3/30, 10%)。Moustafa、Zeinhom和Ahmed也记录了大肠杆菌以外的大肠菌群[18,19,20]。的发病率大肠杆菌在检测的样品中，与Hamid & El Owni[21]所记录的部分一致。这类奶酪的高污染率可能是由于处理、运输或储存在受这类细菌污染的地方或在奶酪加工过程中。这种奶酪不含盐，在保存过程中，盐处理是很重要的，作为一种风味增强剂，可以减少奶酪[22]中的水分含量，抑制有害微生物[23]的生长。

图1:不同干酪样品中大肠菌群的发生率

图1数据显示，检测的硬干酪(Ras或Roomy干酪)中分离大肠菌群的发生率为大肠杆菌(3/30,10%)，枸橼酸杆菌属diversus(2/30, 6.67%)、家蚕(3/30,10%)、肠杆菌属产气菌(4/30,13.34%)、聚团肠杆菌(1/30,3.33%)、大肠下水道(3/30, 10%),肺炎克雷伯氏菌(4/30, 13.33%);肺炎sub. spp。肺炎(2/30, 6.67%)。Elessawy[24]记录了检测样品中大肠杆菌的相似发生率。类似的大肠菌群大肠杆菌Mohamed、Hassan和Sadek等人的记录[25-27]。Ras干酪的加工阶段可能会将污染的风险降到最低，并导致低水平的污染，但可能是在运输、储存或由不干净的处理人员处理的过程中。

抗生素耐药大肠杆菌群:

图(2-6)中的结果解释了对大肠菌群的耐药性，包括大肠杆菌从牛奶和奶酪样品中分离出来的。测试的大肠菌群，按顺序排列c . diversus，弗氏梭菌、泄殖腔梭菌、肺炎克雷伯菌sub. spp。肺炎和大肠杆菌O111对AMC有抗性;山姆和AMC;AMC & CFP;AMC&TE和C、AMC、CFP&TE对其他被试抗生素均表现出敏感性和中间耐药。Wang等人[29]指出检验最多的c . freundii分离株对庆大霉素、妥布霉素和氮曲耐药。研究结果表明，对大豆的敏感率c . freundii对氨基糖苷类和环丙沙星的影响明显降低。Yagoub等人[30]宣称所检测的肠杆菌属从原料奶样本中分离的菌株对青霉素、克林霉素、阿莫西林和氨苄西林具有广泛的耐药性，而Farzana等人[31]表明，受试肠杆菌分离株对萘啶酸、四环素敏感，对氯霉素的耐药性很小。克雷伯氏菌Farzana et al.[31]的研究表明，克雷伯菌对nalidixic酸耐药，对氯霉素耐药较少，而Chauhan et al.[32]的研究表明，克雷伯菌对亚胺培南其次是环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦联合和西他啶。亚胺培南抗菌素克雷伯氏菌spp高度敏感，是首选药物。Nam等人[33]记录了这一点弗氏肠杆菌，阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌分离菌株对阿米卡星、庆大霉素和哌拉西林有较强的抗菌活性，而利福平、头孢噻吩、头孢唑林和氨苄西林对大多数受测细菌无效。Paneto et al.[34]调查了从生牛奶奶酪样品中分离出的产毒大肠杆菌的发生情况，并测试了其对某些抗菌药物的敏感性，发现最常见的耐药性是对头孢菌素、萘啶酸、强力霉素、四环素和氨苄西林，但都进行了测试大肠杆菌根据Aftab-Uddin等人的记录，来自原料奶样品的分离物对利福平和四环素的耐药性为100%，对萘啶酸的耐药性为50%，但对亚胺培南的敏感性为100%。[35]。Sallam[36]记录了这一点大肠杆菌对分离菌株进行了对11种抗生素的敏感性试验;氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、土霉素、四环素、强力霉素、环丙沙星、恩诺沙星、新霉素、庆大霉素、红霉素。耐药率分别为50%、50%、7%、67%、67%、40%、23%、23%、13%、100%。很明显，从过去几年来看，一些品种克雷伯氏菌，肠杆菌属和柠檬酸杆菌在一些急性和慢性疾病的流行病学研究中，已从儿童和成人的粪便和肠道内容物中分离出spp。此外，某些成员柠檬酸杆菌细菌曾被怀疑引起肠道感染。c . freundii在人类[37]的尿路和其他化脓性感染中发现。此外，大肠杆菌和可能的肠道病原体[10]之间存在松散的联系。肺炎克雷伯菌发生于上呼吸道和肠道，可能与呼吸道卡他性疾病、副鼻窦炎、结膜炎和人[38]的肺炎有关。

图2:敏感性c . diversus对某些类型的抗生素

图3:敏感性c . freundii对某些类型的抗生素

图4:敏感性大肠下水道对某些类型的抗生素

图5:敏感性肺炎克雷伯菌sub. spp。肺炎对某些类型的抗生素

图6:敏感性大肠杆菌O111：K58对某些类型的抗生素

分离物的血清学分型大肠杆菌特性:

从表1中记录的结果可以明显看出，一些孤立的大肠杆菌血清型可分为O型111(3株),O119(2株),O55(一株)和O124(应变)。这些发现证实了Saudi和Moawad, Ahmed和Sallam和ElShinawy等人的发现[39-41]。大肠杆菌已确定是引起肠炎和几种胃肠外疾病的病原。此外，这些微生物被认为是人类和反刍动物[42]的病原体。近年来，越来越多的人关注大肠杆菌因为它是一种真正来源于粪便的有机体，可能存在相关的肠道病原体。此外，肠道病原体对公众健康的危害大肠杆菌已被许多研究人员强调，因为它们与人类肠胃炎、婴儿流行性腹泻、儿童散发腹泻以及食物中毒病例有关。但是有6种主要的致泻剂大肠杆菌与食源性疾病有关的；产肠毒素的大肠杆菌由于热不稳定毒素(霍乱类毒素)和热稳定毒素(腹泻毒素)的产生，导致水样腹泻(旅行者腹泻)。致肠病的大肠杆菌(EPEC)与婴儿腹泻、肠出血性有关大肠杆菌可导致血性腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒症综合征和血小板减少性紫癜。Enteroaggregative大肠杆菌(EaggEC)，它在组织细胞或玻璃上排成平行的行，被描述为“堆叠砖一样”，然后精心制作耐热毒素，与溶血素相关的抗原和编码的质粒，稳定毒素，导致持续水样腹泻，尤其是儿童。Enteroinvasive大肠杆菌(EIEC)，可导致发烧和大量含粘液和血丝的水样腹泻。广泛地附着大肠杆菌(DAEC)在一些研究中与腹泻有关，但不一致[44]。

表1:分离物的血清学鉴定大肠杆菌检查样品。

总之，这项研究提供了埃及生奶奶酪中大肠菌群发生率的有意义的数据，并仅仅强调了在埃及制备生奶奶酪时需要实施严格的卫生措施。本研究中发现的最令人担忧的趋势是对抗生素耐药性和潜在产毒的测定大肠杆菌菌株。这一发现使对大肠菌群的持续监测成为一项高度优先事项，以确定食品生产中出现的有害菌株。

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文章类型:研究文章

引用:Elbagory AM, Hammad AM, Alzahraa, Shiha MA(2016)大肠菌群、耐抗生素大肠菌群和大肠杆菌的流行情况大肠杆菌埃及生奶和一些品种生奶奶酪的血清型。营养食品技术2(1):doi http://dx.doi。org/10.16966/2470 - 6086.114

版权:©2016 Elbagory AM等。这是一篇根据知识共享署名许可证条款发行的开放获取文章，允许在任何媒体中不受限制地使用、发行和复制，前提是原始作者和来源均已获得授权。

出版的历史:

  • 收到日期:2016年1月13日

  • 接受日期:2016年2月2日

  • 发表日期:08年2月2016年