摘要

背景/目的:甲钴胺鼻喷雾剂（NasoB12^®(印度，Troikaa)最近被开发以克服目前可用的治疗方法的缺点。本研究旨在比较甲钴胺鼻腔喷雾剂与肌肉注射的药代动力学、安全性和耐受性。

研究对象/方法：这是一项随机、单剂量、开放标签、双向交叉比较生物利用度的研究，研究对象为18名健康志愿者。参与者被给予500微克甲基钴胺通过鼻腔喷雾剂(250 McG /0.05 ml，每个鼻孔一次注射)或100 McG /0.2 ml甲基钴胺通过肌内注射。在每种研究期间收集系列血液样品，在药物施用后测量药物施用，测定B12的血浆浓度。时间观察最大药物浓度（t_最大限度)、最高血药浓度(C_最大限度)和浓度-时间曲线下面积(AUC)比较。

结果:与肌肉注射相比，喷鼻剂对维生素B12的吸收数据显示平均值[T_最大限度]0.2对1.15小时的注射。在没有剂量标准化的情况下进行比较时，鼻腔喷雾剂显示出与肌肉注射相似的生物利用度（AUC比率为104.77%）_0-tAUC为101.85%_0-inf）.剂量正常化后，鼻腔喷雾剂的比较生物利用度与肌注量为~20%。高C_最大限度对于没有剂量标准化的肌肉注射（197.49％）相比，观察到鼻内喷雾;但是，在剂量标准化时_最大限度是39.50%。安全性评价表明，两种治疗方法均具有良好的耐受性。

结论：甲钴胺鼻腔喷雾剂经鼻后可充分吸收维生素B12，可作为当前选择的安全有效替代。

介绍

维生素B12 (B12)也被称为钴胺素，是体内主要反应的辅助因子，这些反应对DNA合成、红细胞形成和神经功能至关重要。B12缺乏可能是由饮食摄入不当、生物利用度问题或吸收不良等因素引起的[2,3]。

B12缺乏传统上用口服配方处理，或者优选重复肌肉注射的钴胺蛋白。肌内注射是痛苦的，不方便，通常与不良反应相关（例如脓肿形成，红斑和血肿）[4,5]。此外，注射物管理需要保健专业人员，这增加了医疗保健系统的经济负担。这可能会影响患者的顺应性并导致停止治疗[6,7]。每日口服维生素B12的口服补充，依赖于内在因子（IF），[8]通过增加年龄，长期伴随的二甲双胍或抗酸治疗，胃泌素手术和患有恶性贫血患者进行阻碍[1,9,10]。

鼻腔给药途径因其容易获得、表面积大、血管化程度高、内皮基膜多孔、有可能绕过第一次代谢以及可能具有较高的全身生物利用度而备受关注与口腔途径[11,12]。鼻内配方克服了肌内配方的缺点:它无痛，自我给药，改善了依从性，消除了卫生专业人员给药的需要，防止注射部位并发症，降低了[13]治疗的总成本。

已经研究过通过鼻路向不同人群输送B12[6,14,15]。氰钴胺鼻喷雾剂已获得监管批准。但根据氰钴胺鼻喷雾剂说明书中的药代动力学数据，该药物不用于治疗恶性贫血患者的B12缺乏，而是用于维持治疗，治疗一个月后，100微克肌注维生素B12治疗缓解，也用于其他[16]不足的补充。

氰钴胺必须经酶转化为两种代谢活性辅酶形式之一(即甲基钴胺和5-脱氧腺苷钴胺)，以发挥其在体内的作用。营养缺乏和酶的缺陷降低了身体合成活性形式[17]的能力。由于甲基钴胺的活性形式绕过了形成功能形式所需的几个酶反应，与氰钴胺[17]相比，它更好地保留在体内，所以在治疗维生素B12缺乏时，考虑甲基钴胺代替氰钴胺是谨慎的。

在其他目前可用的配方上观察鼻内形式提供的配方优势，已经开发了一种新型的鼻内甲基氨基胺喷雾（500mcg / 0.1ml）（Troikaa Pharmaceuticals Limited）。据我们所知，目前的I阶段学习代表了评估新型鼻内甲基氨基氨素喷雾剂的安全性和药代动力学与目前销售肌肉内甲基氨基胺注射液的安全性和药代动力学。本研究是作为随机的单剂量，开放标签，健康人受试者的交叉研究。

方法

Clinical part of the study was carried out at Raptim Research Ltd. The study was approved by the Etiikka (Independent Ethics Committee) IEC and was conducted in compliance with the requirements of ICH (International Conference on Harmonization) E6 ‘Guideline for Good Clinical Practice’ and World Medical Association’s Declaration of Helsinki.

选题

18(18)名健康成年男性受试者，年龄在18至45岁之间，体重指数在18.5至24.9 kg/m²参加了这项研究。所有受试者提供书面知情同意，在入学之前参与该研究，并在研究期间随时免费撤回。仅包括在基线实验室评估的200至900pg / ml的血清中的血清总B12水平的基础，并具有与血液学测试，生物化学，尿液分析和ECG相关的其他正常实验室值与临床调查结果相关。排除了鼻息肉，鼻涕，鼻塞，过敏性鼻炎，呼吸道感染和已知对甲基硅酸甲酰胺的过敏症的受试者。所有受试者符合研究方案中规定的包含和排除标准。

研究设计与药物管理

这是一项1:1随机、单剂量、开放标签、双向交叉比较生物利用度的研究。18名受试者的样本量被认为足以确定测试产品和参比产品之间的显著配方差异。两次处理之间保持15天的冲洗期。该研究于2014年1月8日至29日进行。受试者从给药前大约12小时开始被安置。根据随机化计划(由SAS生成^®美国软件(SAS研究所Inc .)(版本9.2),每个主题收到0.1毫升(500微克)测试喷鼻剂在每个鼻孔(0.05 250微克/毫升)或0.2毫升(100微克)参考IM注射methylcobalamin(卫材生产的卫材、日本)隔夜空腹至少10.00小时后在每一个时期。

安全

在研究期间对所有受试者进行了安全性和耐受性评估。这包括生命体征、健康状况、局部耐受性、心电图、生物化学、血液学和尿液分析。

用于B12分析的血液样本:分别在-10.00、-6.00、0.00小时(基线剂量前样本)和剂量后0.16、0.25、0.33、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.50、3.00、4.00、6.00、8.00、12.00、24.00、48.00、72.00、96.00和120.00小时在预先标记EDTA真空容器中采集血液样本。血液标本4000rpm, 8°-10°C离心10分钟，用于血浆分离。离心后，血浆样品被分离并转移到各自的预先标记的琥珀色eppendorf管中，分成两个等分。

血浆中维生素B12的估算：使用Roche Cobas e411仪器，使用经过验证的电化学发光法测定血浆样本的总维生素B12浓度。使用罗氏诊断公司认证的电化学发光免疫分析试剂盒进行分析，校准范围为30- 2000 pg/ml。本研究对该试剂盒进行了进一步验证，将其分析范围扩大到15000 pg/ml。在所有药代动力学和统计学评价中，定量限度(BLQ)以下的浓度被视为“零”。分析人员在分析完成后才能获得随机化时间表。

药代动力学及统计学分析:主要药代动力学参数C._最大限度,AUC_0-t,AUC_0-inf次要PK参数t_½，K_埃尔和T_最大限度采用WinNonlin®professional(版本5.3)非分区法计算。B12是一种内源性化合物，因此在基线校正和不校正的情况下进行了药动学分析。基线校正是通过从随后的剂量水平中减去平均剂量前水平来完成的。这对于评估来自膳食和内源性干扰的B-12的贡献是可取的。

本研究中的两项治疗含量为5倍差异，并通过不同的途径给出。因此，对于药代动力学参数（如C）也进行剂量标准化_最大限度,AUC_0-t和AUC_0-inf以相同剂量预测相对生物利用度。

在基线校正后，使用SAS系统（美国SAS研究所，版本9.2）对剂量标准化和非标准化数据进行统计分析。对对数转换的药代动力学参数C进行两次单侧方差分析_最大限度,AUC_0-t和AUC_0-inf（α=0.05），以确定试验产品和参考产品之间的差异。未转换T_最大限度使用Wilcoxon签名等级测试。

结果

科目人口统计资料和性格

18名符合选择标准的[18]受试者参与了这项研究。总共有15名受试者完成了这两个阶段的研究。两名受试者在第二阶段没有向研究机构报告，因此退出了研究，一名受试者在第二阶段给药前因个人原因退出了研究。因此，我们考虑对15名完成研究的受试者的数据进行分析。表1给出了研究人群的基线人口学数据，图1描述了受试者的性格。

图1:研究流程图。

	年龄（年）	体重(公斤)	高度（cm）	BMI (kg / m2)	性别	比赛
平均数±标准差	29.8±5.8	64.2±7.3	170.0 ± 5.1	22.2±2.0	男性	亚洲
中位数	29.0	63.0	170.0	22.7

表1:受试者基线的人口统计学特征(N=18)。

安全性和可耐受性

这两种治疗（鼻喷雾剂和IM注射）都具有良好的耐受性。本研究期间未报告严重不良事件。

在研究的第一阶段，一名受试者在使用鼻喷雾剂后报告了一个不良事件(头晕)。在发病当天10分钟内就消失了。不良事件是轻微的，并被判断为可能与研究给药有关，对受试者进行监测，直到不良事件解决。

两名研究对象的研究后临床实验室值与研究前值相比直接显示胆红素水平升高;这些不良事件被认为是轻微的，并被认为可能与所给研究药物有关。

与研究前相比，一名受试者在研究后血清B12水平降低。该不良事件较轻，被判断为与服用的研究药物无关。对所有受试者进行了随访以进行安全性评估。随访结果在可接受范围内。

在研究后安全性评估中，所有参与研究的受试者的生命体征或心电图记录均无显著临床发现。在本研究中没有严重不良事件(SAE)的报道，包括任何鼻路特异性SAE。因此，测试产品和参考产品在安全性方面具有可比性。

药物动力学

两种治疗的平均血浆B12浓度与时间曲线如图2所示。

图2:接受试验(鼻喷雾剂)和参考(IM注射)后总维生素B12的平均血药浓度时间曲线(无基线校正)。
插图:给药试验(鼻喷雾剂)和参考(IM注射)8小时后总维生素B12的平均血药浓度时间曲线(基线校正)。

试验品(鼻内品)和参考品(肌内品)的平均±SD基线B12水平分别为396.14±98.66 pg/ml和368.01±55.83 pg/ml

鼻内甲钴胺喷雾剂导致较早的峰值浓度，平均T_最大限度而IM注射甲钴胺后1.15 h。

表2总结了基线校正和未基线校正以及剂量归一化和未剂量归一化两种治疗的药动学参数。

药代动力学参数	没有基线纠正		与基线校正
	测试产品平均值±SD	参考产品平均值±SD	测试产品平均值±SD	参考产品平均值±SD
C最大限度(pg / ml)	19779.47±6726.28	10263.53±3818.40.	19383.32±6766.21	9895.52±3816.05
CmaxDN(pg / ml)	39.56±13.45	102.64±38.18	38.77±13.53	98.96±38.16
AUC0-t（pg * hr / ml）	123399.31 ± 31342.86	114320.43±20921.10	75533.03±29739.19	70905.39 ± 18740.95
AUC0-tDN（pg * hr / ml）	246.80 ± 62.69	1143.20 ± 209.21	151.07±59.48	709.05±187.41
AUC0-inf (pg *人力资源/毫升)	243363.97±120348.80	262529.22 ± 77288.93	84243.44±29729.80	86604.67±31352.09
AUC0-inf DN（pg * hr / ml）	486.73±240.70.	2625.29±772.89	168.49 ± 59.46	866.05±313.52
T最大限度（人力资源）	0.20 ± 0.06 0.16#	1.15 ± 0.69 1.00#	0.20 ± 0.06 0.16#	1.15 ± 0.69 1.00#
t1／2（人力资源）	164.11 ± 162.6	209.13 ± 98.57	49.54±37.88	65.19±37.02
K埃尔(人力资源1)	0.0118±0.0111	0.0048 ± 0.0053	0.0235±0.0151	0.0206±0.0251

表2:比较药代动力学参数为500μg试验（鼻喷雾）和100μg参考（Im注射）。
AUC：血浆浓度-时间曲线下的面积；AUC_0-inf-血浆浓度以下的区域与从时间0到∞的时间曲线;C_最大限度-最大血浆浓度;T_最大限度，观察血浆t最大药物浓度的时间_1／2消除半衰期;K_e-消除速率常数；DN剂量标准化为甲钴胺1mcg剂量。^＃中位数

表3总结了剂量标准化和非标准化数据的几何最小二乘平均值（%）、90%可信区间和受试者内变异性的比率。

药代动力学参数	几何最小二乘均值比率(%)	90%可信区间	Intrasubject简历(%)
无剂量标准化
C最大限度	197.49	160.48 - -243.05	32.24
AUC0-t	104.77	87.56 - -125.37	27.70
AUC0-inf	101.85	82.42 - -125.86	32.91
与剂量归一化
C最大限度	39.50	32.09-48.61.	32.24
AUC0-t	20.95	17.51 - -25.07	27.70
AUC0-inf	20.37	16.48 - -25.17	32.91

表3:统计分析总结(n=15)。The ratio of geometric least square means (%), 90 % CI and within subject variability for both dosenormalized and non-normalized data.

在剂量标准化之前，B12的总曝光对于鼻喷雾和IM给药类似，几何最小二乘法的测试/参考比率为104.77％和101.85％的AUC_0-t和AUC_0-inf,分别。然而，喷雾剂给药后血浆中B12的平均最大浓度约为IM注射的2倍，以C_最大限度．

在剂量归一化后，与IM注射相比的鼻喷雾的生物利用度为〜20％，由几何最小二乘范围的测试/参考比例为20.95％和20.37％的AUC所示_0-t和AUC_0-inf此外，与IM注射相比，鼻腔喷雾剂给药后血浆中B12的平均最大浓度约为~40%，如C_最大限度．

讨论

这是一项随机、单剂量、开放标签、交叉比较生物利用度研究，目的是确定新型甲钴胺鼻腔喷雾剂与甲钴胺IM注射的安全性和比较生物利用度。我们的研究首次在健康志愿者中通过鼻腔途径吸收甲基钴胺。

B12剂量在这个研究是500微克methylcobalamin鼻喷雾剂和100微克的IM注射,这是符合研究Nascobal®喷鼻剂500微克剂量用于鼻配方和100 mcg IM注射[16],这样的结果可以很容易地比较两个鼻配方。考虑基线校正数据，因为它能更准确地比较配方的性能。

本研究发现甲钴胺鼻腔喷雾剂的生物利用度与肌肉注射相当;然而，剂量归一化后发现为~20%。据报道，商业口服B12片剂的生物利用度很低(~2%)[18]。由于目前甲基钴胺鼻腔制剂的生物利用度更高，与口服治疗相比，它可能导致更快和可靠的治疗B12缺乏。此外，与肌肉注射相比，它是方便的，不需要卫生保健专业人员管理。因此，新型甲钴胺鼻腔喷雾剂可作为治疗维生素B12缺乏的口服和IM制剂的替代方案。

现有文献表明，氰钴胺和羟钴胺鼻腔制剂(相对于肌肉注射)的相对生物利用度估计分别为2-6.1%[16,19]和2-5%[15]。因此，这种新型甲钴胺鼻腔喷雾剂的相对生物利用度比以往报道的要高。

T_最大限度在12±3.6 min(0.20±0.06 h)中，比氰钴胺喷雾剂[16](1.25±1.9 h)和羟钴胺喷雾剂[15](35±13 min)快。

此外，相应的参数C_最大限度，反映了我们研究中观察到的吸收程度为19383 pg/mL，而对于氰钴胺和羟钴胺鼻腔制剂，其吸收程度分别为758 pg/mL[16]和1716 pg/mL（源自750 mcg剂量下1900 pmol/L）[15]这表明甲钴胺的新型鼻腔制剂的吸收率高于其他B12鼻腔制剂的吸收率。

100 mcg剂量以100mcg剂量的氰基霉素肌肉注射用于治疗B12缺乏症。基线纠正C._最大限度在我们的研究中观察到的100 mcg甲钴胺IM注射后的AUC值与文献[20]中观察到的100 mcg氰钴胺IM注射后的AUC值相当。因为甲钴胺鼻喷雾剂（500 mcg剂量）的生物利用度与治疗剂量（100 mcg）的生物利用度相似此外，500 mcg甲钴胺鼻喷雾剂给药后48小时观察到的基线校正平均浓度为211.14±76.69 pg/mL（对应于B12水平从396.14±98.66上升至624.85±145.50 pg/mL）这表明隔日给药方案足以纠正低B12水平。给药5天后观察到的基线校正平均浓度为114.42±51.58 pg/mL（对应于B12水平从396.14±98.66上升至508.08±96.50 pg/mL）这表明每周剂量可用于维持校正后足够的B12水平。这些剂量随后在对103名维生素B12缺乏患者进行的临床试验中进行了评估（临床试验注册：CTRI/2015/06/005952）。

甲基钴胺的安全性已得到证实，500 mcg剂量的IM/IV注射已在世界许多地区得到批准。这在我们的生物利用度研究中也得到了支持，单剂量鼻腔喷雾剂和IM注射都被发现具有良好的耐受性。

结论

新型甲钴胺500 mcg/0.1 ml鼻腔喷雾剂是无痛的，自我给药，耐受性好，安全，鼻腔吸收快，生物利用度与100 mcg IM注射剂相似。因此，它可以为目前口服和注射治疗维生素B12缺乏症提供一个有吸引力的选择

宣言

资金

这项研究是由Troikaa制药有限公司资助的。

临床试验注册中心，CTRI编号：CTRI/2015/04/005687。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。资助者在研究设计中没有作用;在收集，分析或解释数据;在写作稿件，或在决定发布结果。

伦理批准

同意参加

可获得的数据和材料:请联系通讯作者。

代码的可用性

不适用

同意出版和作者贡献

作者的贡献

概念化、方法论、研究指导、形式分析、所有数据的获取、数据的验证和解释:Dave H.所有作者都已阅读并同意该手稿的出版版本。

承认

三驾马车制药有限公司提供的试验产品和支持。

工具书类

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条信息

文章类型:研究文章

引用：Dave H, Agarwal V, Maseeh A, Patel KR(2021)新型甲钴胺鼻腔喷雾剂与肌肉注射:一项随机交叉比较生物利用度研究。Int J Endocrinol Metab Disord 7(1): dx.doi.org/10.16966/2380-548X.171

版权:©2021 Dave H等。这是一篇开放获取的文章，在知识共享署名许可协议的条款下发布，该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制，前提是注明原作者和来源。

出版的历史:

收到的日期：2020年12月15日

接受日期：2021年1月11日

发表日期:2021年1月19日