摘要

目的:由于在46，XY受试者中，位于配体结合域的SF1基因突变与广泛的表型谱相关，因此这些变异的功能和结构特征非常有趣。本研究的目的是评估两名46，XY非相关性发育障碍（DSD）指数患者的临床表型、激素模式和分子研究（遗传、功能数据和蛋白质结构分析）。

方法:进行了临床特征、基因组DNA测序分析、蛋白质预测软件研究和蛋白质结构分析以及突变的功能表征。

结果:这两个指标的DSD患者表现出相似的表型，但家族1的几个受影响成员表现出不同的表型。在家族1中发现了以前报道过的杂合子错义点突变(p.Arg313His)，而在家族2中检测到新的杂合子错义点突变(p.Ser303Arg)。这两种突变都被预测为“可能具有破坏性”。使用两个不同的启动子在两种细胞系中研究了SF1突变体p.Arg313His和p.Ser303Arg的转录活性，显示出显著的反式激活活性降低。结构分析表明，两种突变体之间存在差异，如受体主干的灵活性、配体周围的三级结构和AF-2结构域的变化。

结论：其中一个SF1配体结合域突变在家族成员间表现出表型异质性，而两种变异在青春期前表型、损伤预测和转录活性实验下降方面表现出相似之处，但在结构后果预测方面存在显著差异。最后，本研究加强了46例XY型DSD患者临床表型的广泛变异性的概念。

关键字

Steroidogenic因子- 1;SF1;NR5A1基因;小黑裙突变;46, XY DSD

介绍

甾体激素因子-1 (SF1/AD4BP/FTZF1)在肾上腺和生殖器官分化调控中起关键作用。SF1基因(NR5A1)是位于染色体9q33上的常染色体基因，属于核受体亚家族5,A组[1]中的1号成员。它扩展超过30 kb的基因组DNA，由一个非编码外显子(I)和6个编码外显子(II到VII)组成。

该蛋白由461个氨基酸组成，包括一个包含两个锌指的dna结合域(DBD)，一个包含第一个功能激活域(AF-1)的铰链区域，一个包含第二个功能激活域(AF-2)的12个螺旋的配体结合域(H1-H12)和一个附属区域[2]。甚至在SRY之前，它就已在未分化的性腺中表达，它是睾丸测定和分化所必需的。SF1蛋白在性腺、肾上腺和胎盘等激素源性组织中高表达，并调节与此过程相关的几乎所有酶。在下丘脑腹内侧核和垂体促性腺素中也有表达，并在中枢神经系统[3]中有相关生理作用。

纯合的零小鼠（NR5A1 - / - ）具有肾上腺和性腺刺激，患有XY核型的持久性Müllerian结构，部分下低动制的性腺性腺性腺和其他特征，如过吞咽性，腹侧下丘脑的异常，和晚发肥胖[4,5]。

据报道，在人类中，NR5A1突变可导致46,XY和46,XX性腺发育不良，伴或不伴肾上腺衰竭[6-8]。SF1功能的可变损失与广泛的表型谱相关，表明SF1剂量是关键。迄今为止，在报道的大约81例NR5A1基因蛋白功能突变的患者中，临床表型变化很大，包括女性生殖器、轻度阴蒂肿大、孤立性尿道下裂、睾丸不育症，甚至正常男性生殖器伴不育症[6,9]。在46例中，XX影响女性患者，NR5A1突变与原发性和继发性闭经、绝经早、卵巢储备减少等不同表型相关，但保留生育能力[7,8,10]。

我们正在报道两名XY、DSD指数非相关患者及其受影响家庭成员的临床表型、激素模式和分子研究(遗传、功能数据和蛋白质结构分析)。一个新的杂合子NR5A1基因突变，c.909G>A (p.Ser303Arg)，和之前描述的[8,10]杂合子NR5A1基因突变，c.938G>A (p.Arg313His)，均位于蛋白(LBD)配体结合域高度保守的螺旋5 (H5)外显子5。功能研究和蛋白质结构分析揭示了维持突变致病性的原因。

对象和方法

临床资料

两个家庭有一个指示病例，表现为46 XY的DSD进行了评估。家族1的四代和家族2的两代在图1的家族树中被描述。

在第一家族亲属中受影响成员的临床和生化结果之前有报道[10]。Family 2以前没有报道过。

本研究得到了Garrahan儿科医院伦理委员会的批准。本研究获得了所有成年患者或患者家长或导师的书面知情同意。

NR5A1基因突变分析

通过标准程序从外周血白细胞中提取基因组DNA。使用英国伦敦大学学院J.C.Achermann博士提供的特异引物，通过PCR扩增NR5A1基因的编码外显子（外显子2-7）和侧翼内含子区域。PCR产物得到纯化（Qia快速PCR纯化试剂盒，阿根廷布宜诺斯艾利斯Qiagen），并在ABI PRISM 3130遗传分析仪毛细管DNA测序仪（阿根廷布宜诺斯艾利斯应用生物系统）上使用BigDye Terminator 3.1版循环测序试剂盒（阿根廷布宜诺斯艾利斯应用生物系统）进行测序用于测序的引物与用于PCR的引物相同。获得的核苷酸序列与NR5A1基因的NCBI条目：NG_008176.1进行比较。

在网上蛋白质分析

基于序列同源性的工具SIFT(从容忍中筛选不容忍;http://sift.jcvi.org/)，版本2.0.6和基于结构的工具polyphen2 (Polymorphism Phenotyping v2;http://genetics.bwh。使用默认设置预测错义变异p.Arg313His和p.Ser303Arg的致病性。蛋白原序列从Ensembl和Uniprot/ Swiss-Prot数据库中获得。

图1:两种家庭树的家庭树。正方形代表男性和圈子代表女性。黑色正方形代表受影响的46，被称为男孩的XY科目，黑圆圈代表受影响的46，XX科目。每个家庭中的索引案例由箭头表示。家庭1通过它斜线的圈子代表了未学生的死者。主题I-1（灰色圆圈）在30年时经历更年期，被推断为受影响（不可用于学习）。

定点诱变

为了进行启动子活性实验，我们在pcDNA3 (Invitrogen, Buenos Aires, Argentina)载体中构建了含有人类野生型SF1 cDNA (p-SF1wt)的表达载体。利用特异引物SF1for_pcDNA3 (5 ' ' ggtgtgagggggtttctg3 ')和SF1rev_pcDNA3 (5'GAGAGGAGGAAGGGATGACC3 ')对SF1 cDNA进行PCR扩增生态国际扶轮和XhoH295R细胞系(人肾上腺皮质癌细胞系)的RT-PCR检测到1个酶切位点。使用Zymoclean凝胶DNA回收试剂盒(ZYMO RESEARCH, Buenos Aires, Argentina)对1921-bp PCR产物进行2%琼脂糖凝胶纯化。碎片被消化了EcoRI / Xho并克隆到生态国际扶轮和XhopcDNA3载体的1个位点。该结构的准确性通过测序得到证实。以p-SF1wt为模板(p-R313H和p-S303R)，利用特异性引物，以pcr为基础进行定点突变(QuikChange site-directed mutagenesis Kit, Stratagene, Buenos Aires, Argentina)，获得含有p.g ar313his和p.s 303arg变异的NR5A1表达载体。在功能性研究之前，所有突变质粒的全部序列都通过直接测序得到确认。

在体外NR5A1突变的功能研究

所有评估NR5A1/SF1功能的瞬时基因表达研究均使用Lipofectamine 2000试剂(Invitrogen公司)在24孔板上进行。布宜诺斯艾利斯，阿根廷)根据制造商的协议。每个表达载体(p-SF1wt, p-R313H或p-S303R)与报告质粒(PGL2, Promega, Buenos Aires, PGL2)共转染至SMAT1细胞系(小鼠不成熟支持细胞)或Y1细胞系(小鼠肾上腺皮质肿瘤细胞)。阿根廷)包含由Rodolfo Rey博士(Centro de Investigaciones Endocrinológicas (CEDIE)， Hospital de Niños R. Gutiérrez, Buenos Aires, Argentina)提供的hAMH启动子，p- phah或与报告质粒(PGL3, Promega, Buenos Aires, Argentina)含有h3BHSD2启动子，p-Ph3BHSD2。两个启动子都有SF1的响应元件。转染48小时后，细胞被裂解并检测荧光素酶活性(双荧光素酶报告基因分析系统;节目，布宜诺斯艾利斯，阿根廷)。CMV肾细胞荧光素酶共转染作为转染效率的标志。结果显示为三个独立实验的平均值±扫描电镜，每个重复进行，并表示每个SF1和突变体的荧光素酶活性与空载体的比率。所有数据都标准化了肾细胞活性。 Statistical significance was examined using ANOVA test. Values of p<0.05 were considered significant.

在网上wt蛋白及其变体的结构分析

使用与共调节肽（NCOA-2，KENALLRYLLDKD）和磷脂配体结合的人SF1 WT LBD的X射线晶体结构1ZDT（链B）和磷脂配体（Di-Palmitoyl-3-）制备溶液中的蛋白质复合物Sn-磷脂酰乙醇胺，PEF）。Serico在Silico中引入了Ser303arg和Arg313中突变，其中包含Discovery Studio Visualizer 3.5 [11]。在pH 7.4的离子化的残基的质子化状态（肉眼观察）此外H原子在2.10的分辨率晶体结构缺失的后定义。通过截头八面一体盒的倾斜八半面盒溶解在每种络合物周围延伸至12埃的每个结构，将K +离子分别向电阻（分别为WT，P.SER303ARG和P.ARG313HIS的电阻（7,6或8个抗衡离子）。在与Amber12的砂光模块的周期边界条件下，应用标准经典最小化协议（2500步，同时保持溶剂加上含有500kcal /mol.Å的复合物，其次是琥珀色的边界条件下的周期边界条件下施加了20000步骤套件[12]，将FF03力场分配给SF1和共调节肽，以及对磷脂配体的GAFF参数。还使用Gaussian09 Rev获得了resp原子电荷。A.02 [13]。使用颗粒网EwALD（PME）方法进行处理远程静电学[14]，并且使用10埃的用于直接空间相互作用。分子动力学模拟（MD）在相同条件下在300 k下在300 k下在300 k下进行显式水，使用2 FS集成步骤，并使用摇动算法对H原子进行限制[15]。 After 100 ps equilibration in a NVT ensemble using a Langevin thermostate, 5 ns of NPT simulations were produced withpmemd从AMBER12套装程序[12]。对MD轨迹进行后处理ptraj.在AmberTools的12个[12]模块中，得到了每个复合物的12个[12]和对应于最密集的聚类(用平均链接算法生成的5个聚类)的代表性结构。

结果

临床特征

索引病例家族1[10]，患者IV-2出生时生殖器不明(阴茎2厘米长，阴唇皱襞，严重尿道下裂，腹股沟性腺小)。激素检测显示血清FSH升高，AMH水平降低，hCG刺激下的类固醇激素反应正常(表1)。10个月时进行了腹腔镜检查和双侧兰花固定术。观察到Müllerian结构，右侧性腺活检显示睾丸发育不良，间质细胞和非典型异色生殖细胞缺失。未见原位癌病变。另外46名XY家庭成员(受试者II-1、III-2和III-3)在出生时出现严重的尿道下裂，他们都自发性地发育为男性青春期，其中一人(受试者II-1)是5个孩子的父亲。其中1例46,XX个体(受试者I-1)绝经早(本受试者无法进行生化和遗传评价)，其他3例46,XX家庭成员(受试者III-4、III-5和IV-3) FSH高，AMH低。

家族2的指示病例(患者II-1)为非近亲父母的第一个孩子。婴儿出生时生殖器不明，一出生就被指定为女性。患者在三个月大时被转介作进一步评估。体检时，婴儿阴茎长2.5 cm，肉质组织发育良好，阴囊完整融合，阴囊尿道下裂;双腹股沟性腺均可触及。激素检测显示血清FSH升高，AMH水平降低，hCG刺激下的类固醇激素反应正常(表1)。性别重新划分为男性。Müllerian结构在超声和腹腔镜检查中得到证实。10个月大时右性腺活检显示轻度睾丸发育不良，有间质细胞和少量生殖细胞。他的母亲报告怀孕困难，表现为低AMH和高基础卵泡刺激素血清水平。他的父亲指的是正常的性发育和生育能力。 All affected individuals studied presented normal adrenal function.

突变分析

NR5A1基因分子研究发现，在第1家族中存在c.938G>A (p.a arg313his)杂合子突变，在第2家族中存在新的c.909G>A (p.Ser303Arg)杂合子突变。这两个突变都位于LBD高度保守的H5的外显子5。为了确定这些变化出现频率高的一般人群(单核苷酸多态性数据库),我们寻找这些变化在NCBI数据库和运用基因组浏览器和我们没有找到他们,这表明这两个变化不会共同多态性。此外，我们通过DNA测序在100名健康受试者(200个等位基因)中寻找突变，未检测到携带该突变的等位基因。

NR5A1基因突变预测模型

为了评估氨基酸变化的潜在有害影响，我们使用了两个软件程序SIFT和Polyph-2。SIFT预测基于来自密切相关序列的序列比对中氨基酸残基的保守程度。313位的精氨酸残基和303位的丝氨酸残基高度保守物种间的突变。这些突变被评估为“选择”影响蛋白质的功能的高度有害耐受指数分别为0.00和0.02。polyphen2也进行了同样的评估。该软件预测氨基酸替代对人类蛋白质结构和功能的可能影响，使用直接的物理和比较考虑。两种突变都被预测为很可能有害的得分分别为1.000和0.999。

结构分析

包含点突变p.Ser303Arg和p.Arg313His的两个变体与人类SF1 wt进行了比较。这两个氨基酸变化都位于LBD的H5螺旋。特别是，p.Ser303Arg位于与共调节肽相互作用区域的附近(主要由H12、H3和H4分隔)，而p.Arg313His突变是盐桥H2…H5的一部分，它紧压受体的LBD结构并稳定其活性形式[2,16]。

从溶液中对三个SF1复合物的蛋白主干动态行为的比较可以看出，尽管p.Ser303Arg显示出与SF1 wt相似的结构进化，但对于p.Arg313His变体，它需要更长的时间(近4纳秒(ns))来稳定3D结构，由于失去了盐桥相互作用，它在整体上与其他两种变体不同(图2A)。

以来,据报道,限制的灵活性NR5A1受体击倒激活(17、18),我们将这个问题的三个变体使用均方根之间波动的蛋白质残渣(RMSF)计算每个5 ns仿真的稳定部分(图2 b)。与wt相比，p.Ser303Arg突变使蛋白质在整个结构中明显更加灵活(特别是在H2-H3环和H12螺旋中)，而p.Arg313His突变使受体在几个区域更加坚硬。

alphahelices的整体比较立体的安排和循环的小黑裙在三个变量(图2 c和2 d)突出了这两个点突变引起的三级结构变化的受体配体(H2-H3 / H6-H7循环、β-发夹和编辑/ H7螺旋)和AF-2域(H4、H11和H12),导致后者在一个不同的位置的共激活肽。

表1:受影响个体的血清激素水平可用于研究。
粗体编号表示参考范围之外的值;正常值显示在括号中。SI转换因子：睾酮（纳米摩尔每个
雌二醇（皮克摩尔每升）为3.671；皮质醇（纳摩尔每升）为27.59。
CA =实足年龄。ND =不确定
1岁0.83岁
（*）CIACCIO等。[10]

仔细观察周围形成氢键网络的每个突变及时显示,而与Lys434互动是最影响p.Ser303Arg (SF1 wt)相比,Arg313能力与Glu237建立氢键和Asp309 wt完全失去了在p.Arg313His His313所取代(表2)。

表2:每个点突变附近氢键相互作用的结构分析

最后，通过对LBD跨变异体与配体相互作用的比较，我们发现，p.Ser303Arg突变主要通过改变Lys440的位置以及H2-H3和H6-H7环定义的通道入口的开放来影响SF1与磷脂的相互作用（这导致PEF的极性头部更多地暴露于溶剂中），p.Arg313His突变不会对配体-受体识别产生显著变化（图2E和2F）。

NR5A1突变活性的功能研究

为了检测SF1突变体（p-R313H和p-S303R）和野生型SF1（p-SF1wt）的转录活性，我们在类固醇生成细胞系（SMAT1和Y1）中使用不同的SF1靶基因启动子（p-PhAMH和p-Ph3BHSD2）进行瞬时共转染分析。

在这两种激素源细胞系中，p- sf1wt显著(p<0.05)增加了由人类AMH或3BHSD2启动子驱动的报告基因表达。与p-SF1wt相比，两个错义突变p-R313H或p-S303R的转染均显示了受损的反式激活活性(图3)。

详细说明，在SMAT1细胞系中，具有P-PhamH和P-SF1WT的共转染显着增加了荧光素酶活性（3.00±0.09 Au，平均值±SEM，P <0.05 Anova），而突变体P-R313H和P-S303R显着与P-SF1WT（1.32 AU±0.05和1.09 AU±0.01相比，荧光素酶活性降低，平均值±SEM，P <0.05 ANOVA）（图3A）。与P-PH3BHSD2的共转染在SMAT1细胞系中获得了类似的结果;当测定突变体P-R313H和P-S303R的效果时，在P-SF1WT（6.92 Au±0.25，平均值±0.25，平均值±0.25，平均值±0.25，平均值，P <0.05 Anova）中显着增加了显着的荧光素酶活性。与P-SF1WT（1.91 AU±0.07和2.00 AU±0.08相比，平均值±SEM，P <0.05 ANOVA）（图3B）。

图2:SF1突变的结构分析。面板A -参考初始结构，在模拟过程中每个SF1变量Cα RMSD的结构演化。面板B -由蛋白质残基计算的灵活性，根据时间平均的Cα位置沿每个模拟的稳定部分的RMS波动计算。C和D面板-由一对对蛋白质变体覆盖，证明了LBD中α-螺旋、β-发夹和环状3D配置的主要差异。紫色为SF1 wt蛋白，黄色为R313H突变体，绿色为S303R突变体。AF-2是配体依赖的激活功能，PEF是磷脂配体。用红色圈出来的是共激活肽。面板E和F -配体周围区域的详细信息，通过对蛋白质变体进行比较。紫色为SF1 wt蛋白，黄色为R313H突变体，绿色为S303R突变体。

Y1细胞系,类似的反应如SMAT1细胞系观察p-Ph3BHSD2和p-SF1wt (9.27 AU±0.54,意味着±SEM, p < 0.05方差分析)和突变体p-R313H p-S303R(4.55盟盟±0.17±0.32和4.08分别意味着±SEM, p < 0.05 vs SF1wt,方差分析)(图3 c)。由于p-SF1wt没有增加荧光素酶的活性，无法在Y1细胞系中对这两个突变体与p- phah进行转激活研究。

讨论

我们报道了两个错义突变(p.Arg313His和p.Ser303Arg)在SF1基因的LBD的分子特征，在两个不相关的46,XY DSD患者，都是杂合子状态。

这2例46,XY指数患者的临床和生化表型相似。激素测定显示，该儿童的基础和峰值睾酮正常，血清FSH高，血清AMH低。睾丸发育不良的证据和Müllerian结构的存在表明胚胎胎儿支持细胞在敏感的产前期间分泌AMH失败，这与婴儿期检测到的低水平AMH是一致的。第二个家庭的婴儿，在小发育期评估时，也表现出低血清抑制素B水平，伴FSH升高。在芳香化酶缺乏的男孩中，抑制素B可能是调节正常婴儿男性[19]血清卵泡刺激素分泌的主要因素。这两名患者在出生时最初被指定为女性，但经过仔细评估，在年龄基础T分泌充足(包括对hCG刺激的正常反应，以及成年后可能成功性交)的基础上，建议并被父母接受男性性别重新分配。这一决定也得到了其他46名XY DSD成员的随访支持，他们是第一家庭中自发出现男性青春期的成员，其中一名保留了生育能力[10]，46名XY NR5A1发育异常睾丸中缺乏睾丸肿瘤的报道。

图3：R313H和S303R突变的SMAT1和Y1中的功能分析。利用Ph3BHSD2和phhamh启动子在SMAT1细胞系和Ph3BHSD2启动子在Y1细胞系中分别研究了野生型SF1 (p-SF1wt)和突变体p.Arg313His和p.Ser303Arg (p-R313H和p-S303R)的转录活性。两种细胞系和两种启动子的突变体都表现出反式激活活性的降低。结果显示，与空载体相比，荧光素酶活性增加了1倍(平均值±SD)。所有值都代表了三个单独转染实验的平均值±SEM，每个实验都进行了三个重复。* vs.空向量;** vs. SF1, p<0.05，方差分析。

正如我们之前报告的那样，第一个家庭中受影响的亲属之间存在着显著的差异，从严重的不明确的生殖器到正常的男性外生殖器和保留的生育能力[10].在杂合子NR5A1突变患者中，包括突变位于LBD时，已描述了广泛的表型谱（表3）[5,6,9,20-32].NR5A1突变的表型变异性使得基因型-表型相关性非常困难。在46，XX个携带杂合NR5A1突变的个体中，也描述了可变的性腺表型[7,8,10,20,33-36].在本报告中，4名46，XX受影响的女性血清FSH水平较高，AMH水平较低。研究中的3名年轻成年女性月经正常，2名成功分娩，反映了代偿性卵巢功能障碍。这些女性在出现临床症状或症状之前，可能会经历卵巢储备减少的阶段据报道，卵巢功能衰竭的眼睑下垂[20]。

两种指标患者及其携带NR5A1突变的亲属的肾上腺功能均正常。到目前为止，只有3例有NR5A1突变的患者报告了肾上腺机能不全[37-39]。

这两种错义突变(p.a. arg313his和p.a. ser303arg)的氨基酸替换都发生在物种间高度保守的位点在网上分析

结构分析表明，由于p.Ser303Arg突变体是一个不那么刚性的蛋白，因此其相互作用预计将更加不稳定。另一方面，p.g ar313 his突变导致的灵活性丧失发生在与结构包装(H2-E238和H5-R313)和激活功能域AF-2 (H3-R281和H12-E454)的共激活因子招募相关的几个相互作用区域。在配体通道入口磷脂极性头结合的H11 C-term区域也受到高度影响。与此一致的是，对SF1配体结合域的晶体学研究显示，不同的磷脂结合在其激素结合口袋中[2,16-18,40-42]。

在体外用于评估这两种突变对h3BHSD2和hAMH启动子以及两种不同的类固醇细胞系(SMAT1和Y1)的功能影响的检测显示反式激活活性受损。在这条线上，除了已知的与磷脂的相互作用外，其LBD可能与一些未知的共激活物相互作用，触发肾上腺和性腺发育[43]。即使在体外在LBD中的NR5A1基因突变的一些报告中的研究证实了受害效果（表3），受影响患者的临床表型可变性报告仍然明确。

尽管已知SF1与多个甾体生成酶和生殖、甾体发生和性别分化因子启动子区域的共激活子相互作用[1,6,39]，但杂合突变的分子机制仍有待阐明。

之前描述的大多数患者，包括本报告，在LBD中携带杂合子NR5A1基因突变，支持SF1作用的剂量依赖性概念(表3)。

总而言之，我们报道了2例不相关的46名XY型DSD患者的临床表型、激素研究、分子特征和蛋白结构分析，其中一个之前描述的未进行任何功能研究的NR5A1基因错义突变(p.Arg313His)和一个新的错义突变(p.Ser303Arg)。均处于杂合子状态，位于LBD。在体外和在网上实验论证了它们的功能影响，也为SF1蛋白的结构-功能关系提供了见解。最后，本研究加强了46例XY型DSD患者临床表型的广泛变异性的概念。

表3:46例XY患者SF-1配体结合域的错义突变
*进行硅结构分析;
**使用SIFT和/或polyphen2工具进行分析。
sFSH:血清FSH。
EMS:外部男性化评分(最低1分，最高12分

确认

由阿根廷国家调查委员会Científicas y Técnicas (CONICET)、Fondo para la Investigación Científica y技术委员会(FONCYT)资助。

参考

1. Parker KL，米Da，Lala DS，Ikeda Y，Luo X等。（2002）类固化因子1：内分泌发育的必需介体。最近的PROG HORM RES 57：19-36。［Ref。］
2. Wang W, Zhang C, Marimuthu A, Krupka HI, Tabrizad M, et al.(2005)人类固醇因子-1和肝受体同源物-1的晶体结构。美国国立大学学报102:7505-7510。［Ref。］
3. Mello MP, França ES, Fabbri HC, Maciel-Guerra AT, Guerra-Júnior G(2011)类固醇激素1的多功能作用与性发育障碍。Arq胸罩内分泌代谢55:607-612。［Ref。］
4. Luo X, Ikeda Y, Parker KL(1994)细胞特异性核受体在肾上腺和性腺发育和性别分化中起重要作用。细胞77:481 - 490。［Ref。］
5. Ferraz-de-Souza B, Lin L, Achermann JC(2011)类固醇因子-1 (SF-1, NR5A1)与人类疾病。Mol Cell Endocrinol 336: 198-205。［Ref。］
6. Lin L, Achermann JC(2008)类固醇因子-1 (SF-1, Ad4BP, NR5A1)与睾丸发育障碍。性发展2:200-209。［Ref。］
7. Lourenço D, bruner R, Lin L, De Perdigo A, Weryha G, et al. (2009) NR5A1突变与卵巢功能不全相关。N Engl J Med 360: 1200-1210。［Ref。］
8. jse F, de With LM, Duran KJ, Kloosterman WP, Goverde AJ，等(2012)NR5A1 (SF-1)突变在原发性卵巢功能不全(POI)女性中的作用有限。Fertil Steril 97: 141-146。［Ref。］
9. peace L, Laino L, Preziosi N, Valentini MS, Scommegna S, et al.(2014) 1例性发育障碍患者的纵向激素评估，46,XY核型，1个NR5A1突变。美国医学杂志164A: 2938-2946。［Ref。］
10. Ciaccio M,使用M, Guercio G,德小姐V,马里诺R, et al。(2012)保留生育患者46,XY障碍的性发展由于新NR5A1 / SF1基因的杂合的突变:证据46,XY和46,XX性腺的发育不全表型变化的多个成员的影响。儿科78:119-126。［Ref。］
11. Accelrys Software Inc . (2013) Discovery Studio建模环境。3.5版，圣地亚哥:Accelrys Software Inc.
12. 案例DA、Darden TA、Cheatham TE、Simmerling CL、Wang J等（2012）琥珀色12参考手册。加利福尼亚大学，旧金山。[Ref。］
13. Frisch MJ, Trucks GW, Schlegel HB, Scuseria GE, Robb MA等(2009)官方高斯09文献引证。沃林福德CT.高斯公司。［Ref。］
14. (5)粒子网格Ewald:求解大系统Ewald和的N•log(N)方法。acta physologica sinica(地球物理学报)31(6):893 - 897。
15. (1)正构烷烃的分子动力学。计算机学报23:327-341。［Ref。］
16. Krylova IN, Sablin EP, Moore J, Xu RX, Waitt GM，等(2005)结构分析显示磷脂酰肌醇是NR5孤儿受体SF-1和LRH-1的配体。细胞120:343 - 355。［Ref。］
17. Musille PM, Pathak MC, Lauer JL, Hudson WH, Griffin PR，等(2012)抗糖尿病磷脂核受体复合物揭示了磷脂驱动的基因调控机制。Nat Struct Mol Biol 19: 532-537。
18. Musille PM, Pathak M, Lauer JL, Griffin PR, Ortlund EA(2013)分化序列调节磷脂调节激素受体的配体敏感性。J Biol Chem 288: 20702-20712。［Ref。］
19. Deladoëy J, Flück C, Bex M, Yoshimura N, Harada N, et al.(1999)一种新的P450arom基因突变引起的芳香化酶缺乏:雌激素分泌缺失对男孩血清促性腺激素浓度的影响。临床内分泌代谢杂志84:4050-4054。［Ref。］
20. Warman DM, Costanzo M, Marino R, Berensztein E, Galeano J, et al.(2011)三个新的SF-1 (NR5A1)基因突变发生在两个不相关的家庭中，并有多个受影响的成员:46例XY受试者的家庭变异性和46例有生育能力的卵巢储备低的受试者。儿科75,70 -77。［Ref。］
21. Safari S，Zare-Abdollahi D，Mirfakhraie R，Ghafouri-Fard S，Pouresmaeili F，等。（2014）伊朗家庭含有zooospermia和过早的卵巢内部不足隔离NR5A1突变。更长期的17：301-303。［Ref。］
22. Bashamboo A, ferrazd -de- souza B, Lourenço D, Lin L, Sebire NJ, et al.(2010)人类男性不育与编码类固醇因子1的NR5A1突变相关。Am J Hum Genet 87: 505-512。［Ref。］
23. Allali S, Muller JB, Brauner R, Lourenço D, Boudjenah R, et al.(2011)包括尿道下裂在内的性发育XY障碍(DSD)患者77例中NR5A1编码类固醇因子1的突变分析。PLoS One 6: e24117。［Ref。］
24. Philibert P, Polak M, Colmenares A, lorta - jacob S, Audran F, et al.(2011)一46,XY性发育障碍患者的主要支持细胞缺失，该患者由其未受影响的父亲传播新的NR5A1/SF-1突变。Fertil Steril 95: 1788.e5-e9。［Ref。］
25. Yagi H, Takagi M, Kon M, Igarashi M, Fukami M, et al.(2015)新NR5A1突变家族的生育能力保存。endocj 62: 289-295。［Ref。］
26. Adamovic T, Chen Y, Thai HT, Zhang X, Markljung E, et al.(2012)类固醇因子-1 (SF-1)基因p.G146A和p.P125P多态性不影响白种人尿道下裂的风险。性发展6:292-297。［Ref。］
27. Tantawy S, Lin L, Akkurt I, Borck G, Klingmüller D, et al.(2012) 2例性发育障碍和新NR5A1 (SF-1)突变的XY患者青春期睾丸激素的产生。Eur J Endocrinol 167: 125-130。［Ref。］
28. (2007) 24例双侧神经症男孩中类固醇因子1 (NR5A1)的突变分析:一项法国合作研究。Hum repro22: 3255-3261。［Ref。］
29. Baetens D, Mladenov W, Delle Chiaie B, Menten B, Desloovere A, et al.(2014)对46例XY新生儿和非典型性发育婴儿进行广泛的临床、激素和遗传筛查。孤儿J罕见病9:209。［Ref。］
30. Philibert P, Leprieur E, Zenaty D, Thibaud E, Polak M, et al.(2010)激素致因因子-1 (SF-1)基因突变是46,XY，低睾酮浓度女性青少年原发性闭经的常见原因。再生生物学内分泌8:28。［Ref。］
31. Lin L, Philibert P, ferraze -de- souza B, Kelberman D, Homfray T, et al.(2007)类固醇基因1杂合错义突变(SF1/Ad4BP, NR5A1)与肾上腺功能正常的46,XY性发育障碍相关。临床内分泌代谢杂志92:991-999。［Ref。］
32. Ahmed SF, Cheng A, Dovey L, Hawkins JR, Martin H，等(2000)278例雄激素不敏感综合征临床病例的表型特征、雄激素受体结合和突变分析。临床内分泌代谢杂志85:658-665。［Ref。］
33. Suwanai AS, Ishii T, Haruna H, Yamataka A, Narumi S, et al.(2013)两个新的NR5A1突变家族:焦虑和/或抑郁精神症状的可能临床表型。临床内分泌(Oxf) 78: 957-965。［Ref。］
34. Camats N, Pandey AV, Fernández-Cancio M, Andaluz P, Janner M, et al. (2012) NR5A1基因10个新突变导致46例XY和46例XX个体的性发育障碍和卵巢功能不全。临床内分泌代谢杂志97:E1294-E1306。［Ref。］
35. philippe P, Paris F, Lakhal B, Audran F, Gaspari L, et al.(2013) 26例原发性卵巢功能不全年轻女性中NR5A1 (SF-1)基因变异。Fertil Steril 99: 484-489。［Ref。］
36. Fabbri HC, de Andrade JG, Soardi FC, de Calais FL, Petroli RJ, et al.(2014)在3例睾丸激素水平正常的46,XY兄弟姐妹及其原发性卵巢功能不全的母亲中发现NR5A1基因p.Cys65Tyr突变。BMC Med Genet 15: 7。［Ref。］
37. Achermann JC, Ito M, Ito M, Hindmarsh PC, Jameson JL(1999)编码类固醇基因因子-1的基因突变导致人类XY性逆转和肾上腺衰竭。Nat Genet 22:25 -126。［Ref。］
38. Biason-Lauber A, Schoenle EJ(2000)在一个转录不活跃的类固醇因子-1 (NR5A1/SF-1)和肾上腺皮质功能不全的青春期前女孩的卵巢分化明显正常。Am J Hum Genet 67: 1563-1568。［Ref。］
39. Achermann JC, Ozisik G, Ito M, Orun UA, Harmanci K，等(2002)生殖腺测定和肾上腺发育受孤儿核受体类固醇因子-1以剂量依赖的方式调控。临床内分泌代谢杂志87:1829-1833。［Ref。］
40. 张晓东，张晓东，张晓东，等。(2009)SF-1与不同磷脂结合的结构:调节配体的证据。Mol Endocrinol 23: 25-34。［Ref。］
41. Blind RD, Sabling EP, Kuchenbecker KM, Chiu HJ, Deacon AM, et al.(2014)信号磷脂PIP3在核受体SF-1上创造了一个新的相互作用表面。美国国立大学学报(自然科学版)111:15054-15059。［Ref。］
42. Urs AN, Dammer E, Kelly S, Wang E, Merrill AH Jr，等(2007)甾体生成因子-1是一种鞘脂结合蛋白。Mol Cell Endocrinol 265-266: 174-178。［Ref。］
43. Correa RV, Domenice S, Bingham NC, Billerbeck AE, Rainey WE, et .(2004)人类甾体激素因子1配体结合域的微缺失导致XY性逆转，而不伴有肾上腺功能不全。临床内分泌代谢杂志89:1767-1772。［Ref。］

在此下载临时PDF

文章信息

文章类型:研究文章

引用:Pérez Garrido N, Saraco N, Marino R, Ramírez P, Ciaccio M, et al.(2015)位于SF1配体结合域的两个突变的功能特征。Int J Endocrinol Metab Disord 1(4): doi http://dx.doi.org/10.16966/2380- 548X.117

版权：©2015PérezGarridoN，等人。这是在创意公约归因许可的条款下分发的开放式文章，其允许在任何媒体中不受限制地使用，分发和再现，只要原始作者和来源被记入。

出版的历史:

收到日期:2015年11月4

接受日期：2015年11月19日

出版日期：2015年11月24日