摘要

摘要目的:矿皮质激素受体拮抗剂已被证明可以降低心力衰竭患者的死亡率和降低心肾疾病患者的蛋白尿。本研究的主要目的是评估KBP-5074的临床前安全性，以支持在人体内开展临床试验。

结果：包括KBP-5074的遗传毒性研究体外CD-1小鼠的致突变性和染色体畸变研究以及体内微核试验。KBP-5074既无致突变作用，也无致裂作用。SD大鼠和Beagle犬急性口服KBP-5074，最大耐受剂量均≥600 mg/kg。采用0、2、6和20 mg/kg/d口服大鼠进行为期4周的毒性研究。在研究期间，任何大鼠口服KBP-5074后均未观察到明显的临床或行为毒性迹象。第29天，与治疗相关的临床化学变化包括雌性大鼠肝酶、血尿素氮、碱性磷酸酶和血浆钾浓度升高。在第29天，雄性大鼠的临床化学参数没有变化。雌性大鼠的血浆浓度约为雄性大鼠的2-3倍。采用0、2、6和20 mg/ kg/d进行为期4周的犬口服毒性研究。公、母犬口服KBP-5074，剂量为20 mg/kg/d，连续4周未见明显的临床或行为毒性迹象。 Safety pharmacology studies, including体外hERG分析（IC）₅₀：17µM）和在活的有机体内大鼠中枢神经系统安全性药理学研究和狗心血管安全性药理学研究的核心小组最终证明，KBP-5074在剂量分别高达10和15 mg/kg时具有良好的耐受性。

结论:基于上述研究结果，KBP-5074的临床前安全性将支持该研究的首次人类研究。

关键词

盐皮质激素受体拮抗剂;Cardiorenal疾病;慢性肾脏疾病;收缩压;血钾过高

介绍

KBP-5074是一种非甾体盐皮质激素受体拮抗剂（MRA），可阻断醛固酮的结合，醛固酮是肾素-血管紧张素-醛固酮系统的一个组成部分。醛固酮与上皮（如肾脏）和非上皮（如心脏、血管和大脑）组织中的盐皮质激素受体（MR）结合，并通过诱导钠重吸收和可能的其他机制增加血压。KBP-5074与重组人MR选择性结合体外敌对的活动(集成电路₅₀: 2.7 nM)，优于其他MRAs[1]。MRAs已被证明可以降低心力衰竭患者的死亡风险，并减少慢性肾病(CKD)患者的蛋白尿。Rossignol等人最近报道MRAs可改善收缩期心衰患者的预后，但可能加重肾功能并诱发高血钾。高血压和高血压肾损害是美国发病率和死亡率的主要原因。尽管高血压和肾衰竭的治疗已经取得了相当大的进展，但新疗法的发展仍然至关重要。MR是类固醇受体家族的一员，已被证实在肾脏疾病的进展中具有重要的病理生理作用[4,5]。抑制MR信号可显著降低慢性肾病患者的蛋白尿[4,6]。依普利酮是一种高选择性醛固酮阻滞剂，用于治疗高血压和心力衰竭。然而，与依普利酮的MR拮抗可引起血钾浓度[7]的剂量依赖性增加。如果有肾功能不全、糖尿病和微量白蛋白尿的患者使用目前可用的MRAs[8]治疗，高钾血症的风险也可能很高。 As a result, a novel MRA with an improved efficacy and a low potential for adverse effects would address this unmet medical need. The primary objective of this study was to evaluate the preclinical safety profile of KBP-5074 for the initiation of the First-in-Human (FIH) study.

材料和方法

非临床实验室研究遵循现行美国食品药品监督管理局的良好实验室规范(GLP)法规、21联邦法规(CFR)第58部分和中国食品药品监督管理局(CFDA)的GLP法规(2003年9月)。

KBP-5074的化学描述

化学名称：2-chloro-4 - [(3 s 3 ar) 3-cyclopentyl-7 - (4-hydroxypiperidine-1-carbonyl) 3, 3, 4, 5-tetrahydro-2Hpyrazolo[3、4 f] quinolin-2-yl]苄腈

相对分子质量:504.02克/摩尔

外观:黄色或绿黄色结晶粉末

遗传毒理学

两个体外一项体内研究是按照ICH关于人用药物遗传毒性测试的指导原则进行的[9,10]。

诱变试验鼠伤寒沙门菌：以TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535 5个试验品系为试株，在1.5、5、15、50和150µg/板的剂量水平评价KBP-5074的致突变性。直接诱变剂德克森(25µg/plate)、直接诱变剂叠氮化钠(SA)(6µg/plate)、间接诱变剂2-氨基蒽(2-AA)(3µg/plate)的溶剂对照(DMSO)和阳性对照。这项研究的剂量是根据初步剂量范围研究的结果决定的。所有5个试验菌株在5000µg/平板的所有剂量水平上都没有注意到试验物品的毒性。在150-5000µg/板的剂量水平上有沉淀。根据ICH指南S2(R1)，本研究以150µg/板的最低沉淀剂量为最高剂量，以50µg/板、15µg/板、5µg/板为低剂量。

中国仓鼠肺成纤维细胞染色体畸变研究在初步细胞毒性研究中，5µg/mL的KBP-5074的抑制率为60%，并且在5µg/mL的剂量下观察到细胞杀伤作用≥ 在不存在S9的情况下处理24小时时为15µg/mL。当剂量为≥ 在有或无S9存在的情况下处理4小时时为50µg/mL；在15µg/mL时，抑制率分别为39%和36%。本试验中，KBP-5074的最终浓度分别为20、6和2µg/mL（在不存在S9的情况下处理4小时）和5、1.5和0.5µg/mL（在不存在S9的情况下处理24小时）。试验中还包括0.1µg/mL的直接碎屑源丝裂霉素C（MMC）和10µg/mL的间接碎屑源环磷酰胺一水合物（CP）的溶媒对照（1%二甲基亚砜）和阳性对照。在不含S9的情况下，用供试品或对照品处理后，将细胞培养24小时；在不含S9的情况下，用供试品或对照品处理后，将细胞培养4小时；在切换至不含供试品或对照品的正常培养基后，将细胞培养20小时。在本研究中，每次治疗均使用重复的烧瓶。细胞培养物在收获前用秋水仙碱（0.01 mg/mL，0.15 mL）处理4小时。在培养结束时，收集每个烧瓶的细胞培养物，用低渗溶液（0.075 M氯化钾）处理，固定并处理到染色体玻片上。每次治疗总共评估200或100个分布良好的中期细胞，并计算每次治疗的染色体畸变。

CD-1小鼠的口腔微核试验：将70只CD-1小鼠分为5组，10只/性别为阴性对照组和受检品高剂量组，5只/性别为阳性对照组(环磷酰胺)组和受检品低、中剂量组。在阴性对照组和高剂量组中，5位/性别/组在给药后24小时采集骨髓，其余5位/性别在给药后48小时采集骨髓。根据KBP-5074的最大溶解度和20 ml/kg的剂量容限，将本研究的高剂量设定为600 mg/kg。KBP-5074固体分散体在小鼠实验中的剂量分别为60、200和600 mg/kg。

大鼠和犬的口服毒性动力学研究

啮齿动物和非啮齿动物的研究是按照动物护理和使用委员会的指导方针进行的。德赢vwin首页网址

急性和4周大鼠毒性研究：在急性大鼠研究中，将80只雌雄SD大鼠分为4组(10只/性别/组)。高剂量为600 mg/kg，因为这是KBP-5074配方的最高可行浓度。大鼠第1天口服KBP-5074，剂量分别为0(注射用无菌水)、60、200或600 mg/kg。所有动物在第15天安乐死，并检查肉眼病理。

在四周的研究中,共有196 SD大鼠(98 /性)被分配给8组根据体重在两种性别中,其中120老鼠被分配给组1、2、3和4(15 /性/组)为主要研究和10大鼠组5(5 /性)或66大鼠组6、7和8(11 /性/组)的毒性动力学研究。第1、5组和KBP-5074灌胃给药，第2组和第3、7组分别灌胃2mg /kg/d和6mg /kg/d，第4、8组分别灌胃20mg /kg/d。第1 ~ 4组前10只/性别/组和第5 ~ 8组所有动物于第29天实施安乐死，第1 ~ 4组其余动物于第57天实施安乐死。在毒性动力学研究中，在给药前0小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时和24小时采集每只动物第1天和第28天的血液样本。然后将血液样本离心，使用经过验证的LC-MS/MS方法分析KBP-5074的血浆浓度。

急性和4周的狗毒性研究:在急性口腔犬研究中，共有8只雄性和雌性比格犬被分为4组（1/性别/组）。每只狗在第1天分别以0（溶媒）、60、200和600 mg/kg的剂量单次口服KBP-5074。所有动物在第15天被安乐死，并进行大体病理检查。

在为期4周的研究中，将48只雄性和雌性Beagle犬分为4组(6只/性别/组)，第1组给予无菌水(注射用)，第2组、第3组和第4组分别给予kpp -5074固体分散体2、6、20 mg/kg/d剂量。前4只/性别/组的狗在给药4周后第29天实施安乐死，其余2只/性别/组的狗在给药4周后的恢复期后第57天实施安乐死。所有动物均进行完整的尸检和组织病理学评估。在毒性动力学研究中，分别在0(给药前)，0.5,1,2,4,6采集血液样本。8、12、24小时后用LC-MS/MS法分析。

安全药理学研究

根据ICH《人用药品注册技术要求》（2000年11月8日）制定的指南，按照GLP进行安全药理学核心电池的实验设计，以研究KBP-5074对生命功能的影响。

灌胃对SD大鼠中枢神经系统功能的影响:采用功能观察组(FOB)试验评价单次灌胃KBP5074固体弥散剂对SD大鼠中枢神经系统功能的急性效应。40只大鼠(雌性20只，雄性20只)分为对照组(无菌水)和三个处理组(KBP-5074固体分散体:1,3和10 mg/kg)，每组10只大鼠(雌性5只，雄性5只)。在给药后4 h、24 h和48 h内对所有实验组大鼠进行评价，并与对照组大鼠进行比较。在所有的家笼观察、手持式观察、野外观察或刺激活动反应中均未发现与治疗相关的异常。比较各组饲养次数、排便次数、前肢握力和体温。给药后4、24、48小时未见异常。

对有意识比格犬心血管和呼吸功能的影响:采用Beagle犬(4只/性别)，通过遥测技术评价单次口服KBP-5074固体弥散剂对心血管和呼吸系统功能的急性影响。在latsquare设计中，神志清醒的狗被给予对照剂(注射用无菌水)或KBP-5074固体分散体(0.6、3或15 mg/kg)，洗脱期为2天。进行以下评估:平均动脉血压(MBP)、舒张、收缩压(DBP、SBP)、心电图参数[PR间期、QRS间期、QT间期(QTcF间期)、QRS电压、心率(HR)、ST电压、T_次在给药前约1小时、给药后0.5小时（±5分钟）、1小时（±10分钟）、2小时（±10分钟）、3小时（±15分钟）、4小时（±15分钟）、6小时（±30分钟）、8小时（±30分钟）、12小时（±45分钟）和24小时（±1小时）记录并分析间隔和RR间隔）、呼吸频率、潮气量和体温。

结果

遗传毒理学

体外诱变:将KBP-5074配方与PBS/S9和顶部琼脂以150µg /板的剂量混合，出现浑浊。150µg/板孵育结束时无浑浊现象。其他剂量水平未见浑浊。无论S9是否存在，背景草坪均未见异常，表明KBP-5074在1.5 ~ 150µg/板的所有剂量水平均无细胞毒性。溶剂对照组的恢复菌落计数在各自试验菌株的历史内部范围内。所有试验菌株中，2-AA伴S9阳性对照组和不伴S9的Dexon或SA阳性对照组的回归菌落计数显著增加(P≤0.05)，表明预期的阳性结果。在1.5 - 150 μ g/板的剂量水平下，没有检测到任何试验品系的恢复菌落计数增加。在1.5 - 150 μ g/板的剂量水平上，恢复菌落计数的轻微但有统计学意义的变化(P≤0.05)被认为是正常内部范围内的正常波动。综上所述，KBP-5074在1.5 ~ 150µg/板的剂量水平上无细胞毒性。在本研究条件下，KBP-5074在1.5 - 150 μ g/板剂量水平下均未见致突变性。

体外染色体畸变:在KBP-5074的任何剂量配方中均未发现沉淀，当该配方添加到细胞培养中时也未发现沉淀。与对照相比，在含有S9的CP处理细胞中(11%)和MMC处理细胞中(15%和60%)染色体畸变率显著增加(P≤0.05)，表明预期的阳性结果。与对照相比，KBP-5074处理组S9和S9处理组的染色体畸变率均无显著增加(P>0.05)，其比值均不超过2%。综上所述，在本实验条件下，当S9不存在或不存在时，KBP-5074在浓度为20µg/mL处理4小时和S9不存在时浓度为5µg/mL处理24小时的染色体畸变试验中未发现遗传毒性。

在活的有机体内小鼠微核:在研究期间，雄性和雌性小鼠均未观察到明显的毒性临床症状。与对照组相比，在所有剂量水平上，PCE占总红细胞的比例均无显著增加，表明在试验中，KBP-5074固体分散体在所有剂量水平上均未发现骨髓毒性。与对照相比，阳性对照组两性微核发生率均显著升高(P≤0.05)，提示预期阳性结果。与对照相比，KBP-5074处理组小鼠的微核发生率在24小时后两性均无显著增加。显著增加(P≤0.05)在微核的发病率在男女大剂量水平组测试文章48小时post-dose(表1)。没有毒理学意义的增加被认为是消极的控制范围内的值是3%为cd -老鼠发表。

集团	动物数量	24小时post-dose		48小时post-dose
		男性/女性微核数	男性/女性微核发生率	男性/女性微核数	男性/女性微核发生率
1	5	1/0	0.1/0.0	2/2	0.2/0.2
2	5	5/5	0.5/0.5	-/-	-/-
3.	5	2/1	0.2/0.1	-/-	-/-
4	5	1/0	0.1/0.0	9／11	0.9*/1.1*
5	5	291/350	29.1*/35.0*	-/-	-/-

表1：雄性和雌性CD-1小鼠口服KBP-5074的微核试验。
*P≤ 0.05与第1组车辆对照组相比。
第2、3、4组小鼠分别以60、200和600 mg/kg的剂量口服KBP-5074。
第5组小鼠接受环磷酰胺（阳性对照）；
“-”:空白。

大鼠和狗的口服毒性研究

SD大鼠急性口服毒性研究:在整个研究过程中，没有发现任何老鼠死亡。治疗相关的临床观察异常，包括粪便呈绿色，大便软，肛门区域脏，9/10的男性和8/10的女性在给药后约3-8小时，600 mg/kg，第1天，随后从第2天恢复。瞬态降低体重增幅在对待动物而负对照组4天,尤其是高女性在600毫克/公斤(近似7.5%体重损失)观察从第八天逐渐复苏,这与减少食品消费在600毫克/公斤1 - 3天第四天的逐步复苏。在15天末次尸检时，没有发现任何动物的肉眼异常。基于这些结果，KBP5074单次口服给药后，雄性和雌性大鼠的最大耐受剂量(MTD)等于或大于600 mg/kg。

SD大鼠4周口服毒性研究：本研究选择剂量水平的基本原理是基于大鼠14天口服灌胃范围发现研究的结果(补充数据;(附录A)。对照组和KBP-5074处理的动物均未观察到死亡和明显的临床毒性迹象。与对照组相比，雌性大鼠在6和20 mg/kg/d时，平均体重和体重增加均出现剂量相关下降。在雄性大鼠中，20 mg/kg/d组的平均增重略有下降。第1周，雌性大鼠在6毫克/公斤/天的摄取量显著减少，雄性和雌性大鼠在20毫克/公斤/天的摄取量显著减少。上述变化在无治疗恢复期是可逆的。第29天与治疗相关的临床化学参数的变化包括:6和20 mg/kg/d组丙氨酸转氨酶、血尿素氮、20 mg/kg/d组天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶和钾浓度升高(表2)。在第29天，钠和氯水平为20 mg/kg/d组，但这些变化在第59天可逆。第29天，雄性大鼠在20mg /kg/d时，任何临床化学参数均未见显著变化。

集团	剂量水平(毫克/公斤/天)	老鼠数量		K +(更易/ L)男性	K +(更易/ L)的女性
1	0	10	的意思是	4.98	4.43
			SE	0.10	0.13
2	2	10	的意思是	5．12	4.43
			SE	0.09	0.13
3.	6	10	的意思是	5.05	4.78
			SE	0.15	0.19
4	20.	10	的意思是	5.17	5.06 *
			SE	0.13	0.21

表2：第29天大鼠血浆钾浓度总结。
*P≤ 0.05与对照组（第1组）。

在雄性和雌性大鼠口服2、6和20 mg/kg/d后，测定了血浆KBP-5074浓度的剂量相关性增加(补充数据;(附录B)。在雌性大鼠中，KBP-5074的血浆水平似乎高出2-3倍。药代动力学分析显示C_最大值和AUC_{（0-24小时）}KBP-5074在第1天和第28天的剂量范围为2 ~ 20 mg/kg/d(图1-4，表3)。连续给药28天后，没有明显的药物积累。

图1:C_最大值KBP-5074在第1天和第28天的值。

图2:C_最大值第1天和第28天雌性大鼠的KBP-5074值。

图3:AUC_{（0-24小时）}KBP-5074在第1天和第28天的值。

图4:AUC_{（0-24小时）}第1天和第28天雌性大鼠的KBP-5074值。

剂量（mg/公斤/天)	日期	性	C最大值(ng / mL)	AUC（0-24小时） (h * ng / mL)	AUC（0-24小时） 类风湿性关节炎“透明国际”o
2	第一天	男性	257	2552
		女	383	5832
	第28天	男性	353	2548
		女	653	8753
6	第一天	男性	698	6596	2.58
		女	1095	18384	3.15
	第28天	男性	1327	10393	4.08
		女	2010	24047	2.75
20.	第一天	男性	2273	25191	9.87
		女	3980	64717	11.1
	第28天	男性	3347	25858	10．2
		女	5230	81093	9.26

表3:KBP-5074在大鼠体内的4周毒性研究

给药6和20 mg/kg/天的雌性大鼠肾脏重量（相对于身体和大脑重量）增加，给药29天的雄性大鼠前列腺重量相对于身体和大脑重量的剂量相关增加。这些变化是可逆的，没有相应的组织病理学发现。在所有20 mg/kg/天治疗的雄性和雌性大鼠中，肾上腺肾小球带可逆性肥大的严重程度为轻度至中度，在6 mg/kg/天治疗的雌性大鼠中，其严重程度最低。20 mg/kg/天组的三名男性以及2 mg/kg/天和6 mg/kg/天组各一名男性出现不可逆的轻度至中度男性乳腺萎缩。雄性乳腺萎缩是一种大鼠特有的发现，通常表现为激素改变（雄激素减少或催乳素刺激增加）。雄性大鼠乳腺对激素破坏特别敏感，据报道，抗雄激素活性或高催乳素血症会导致乳腺萎缩[11-13]。雄性大鼠乳腺萎缩可能不具代表性。它缺乏临床意义，被认为与临床无关。这支持了其他研究人员的假设，即在大鼠身上观察到的乳腺形态变化可能在人类和其他动物物种身上并不存在[14]。在以下任何参数中均未发现与治疗相关的毒理学发现：临床观察、检眼镜检查、血液学、凝血和尿液分析。综上所述，给大鼠28天后，KBP-5074的NOAEL为6 mg/kg/天。相应的AUC_{（0-24小时）}和C_最大值KBP-5074在第28天分别为10393.35 ng*h/ml和1326.67 ng/ml，雌性分别为24046.75 ng*h/ml和2010.00 ng/ml(表3)。

beagle犬急性口服毒性研究:在整个研究过程中，没有发现任何动物死亡。没有观察到明显的异常的三个治疗组在整个研究除了呕吐后15分钟内指出剂量组雌性动物,2(60毫克/公斤),雌性动物在3组(200毫克/公斤)在第二天和两只动物在4组(600毫克/公斤)天2、3和/或5;此外，第3组雄性动物在第2天和第3天出现软粪便(200 mg/kg)。在整个研究中，以下任何一项均未发现明显异常:体重、饮食、体温、心电图、血液学、凝血或临床化学。在第15天的定期尸检中未发现肉眼可见的病变。综上所述，KBP-5074固体分散体以60、200或600 mg/kg单剂量口服给药后，没有发现明显的毒性反应。KBP5074的MTD≥600 mg/kg。

beagle犬4周口服毒性研究:本研究中选择剂量水平的理由是基于为期7天的狗口服灌胃测距研究的结果（补充数据；附录C）.在研究期间，未观察到任何对照组或治疗组动物的死亡率或临床毒性迹象。在第7天至第28天期间，以6和20 mg/kg/天的剂量口服KBP-5074后，观察到动物的体重增加略有下降趋势，在第21天至第28天期间，雌性动物的体重变化逐渐恢复在4周的恢复期内观察到体重。从第13天到第27天，雄性动物在20 mg/kg/天时的食物消耗量明显减少。这些变化与体重下降相关。体温、心电图、尿液分析、检眼镜检查、血液学、凝血和血液学无明显变化d在整个研究过程中观察到任何动物的临床化学参数。与给药前（第6天）和对照组相比，雄性和雌性狗口服KBP-5074后的血浆浓度没有显著差异（表4）。

集团	剂量水平(毫克/公斤/天)		第6天 K+（mmol/L）雄性	天29 K+(更易与升 男性	第57天 K+（mmol/L）雄性	第6天 K+（mmol/L）雌性	第29天 K+（mmol/L）雌性	第57天 K+（mmol/L）雌性
1	0	的意思是	5.08	4.61	5.19	4.51	4.41	4.63
		SE	0.09	0.03	0.41	0.12	0.07	0.12
		N	6	6	2	6	6	2
2	2	的意思是	5.03	4.64	5.11	4.44	4.25	4.47
		SE	0.11	0.14	0.15	0.03	0.03	0.19
		N	6	6	2	6	6	2
3.	6	的意思是	4.99	4.84	4.90	4.70	4.57	5.14
		SE	0.15	0.08	0.02	0.13	0.13	0.20
		N	6	6	2	6	6	2
4	20.	的意思是	4.90	4.83	4.96	4.68	4.64	4.97
		SE	0.10	0.14	0.12	0.06	0.11	0.31
		N	6	6	2	6	6	2

表4:雄性和雌性比格犬的血浆钾浓度。

图5-7显示了雄性和雌性狗在第1天和第28天以2、6和20 mg/kg/天的剂量口服给药后的血浆KBP-5074浓度。在雄性和雌性狗之间未观察到KBP-5074血浆系统暴露的显著差异（补充数据；附录D）因此，将雄性和雌性的血浆KBP5074数据汇总用于计算毒代动力学参数（表5）_最大值和AUC_{（0-24小时）}KBP-5074的值随剂量在2-20 mg/kg/d范围内成比例增加。连续给药28天后未见明显药物积累。2、6和20 mg/kg/d时，KBP5074的累积因子分别为0.83、1.10和1.05(表5)。

图5：KBP-5074的血浆浓度在2毫克/公斤/天的公、母犬。

图6:KBP-5074在雄性和雌性狗的血浆浓度为6毫克/公斤/天。

图7:雄性和雌性狗在20 mg/kg/天时的KBP-5074血浆浓度。

剂量mg/kg/天	时间		C最大值(ng / mL)	AUC（0-24小时）(h * ng / mL)	人工智能	C最大值比	AUC（0-24小时）比
2	第一天	N	12	12
		意思是	530	3032
		SD	173	800
	第28天	N	12	12
		意思是	364	2520	0.83
		SD	199	1232
6	第一天	N	12	12
		意思是	885	7413		1.67	2.45
		SD	309	3512
	第28天	N	12	12
		意思是	759	8188	1.10	2.09	3.25
		SD	499	6646
20.	第一天	N	12	12
		意思是	2770	27661		5.23	9.12
		SD	1733	23440
	第28天	N	12	12
		意思是	2700	29000	1.05	7.42	11.51
		SD	1158	16637

表5:Beagle犬口服4周毒性研究KBP-5074 TK参数
AI=（AUC）_{（0-24小时）}D28 /剂量)/ (AUC)_{（0-24小时）}D1/剂量）；
C_最大值率= C_最大值/ C_maxlow剂量；
AUC_{（0-24小时）}率= AUC_{（0-24小时）}/ AUC_{（0-24小时）低剂量}．

第1天，平均AUC_{（0-24小时）}和C_最大值比例分别为1:2.45:9.12和1:1.67:5.23。在第28天，平均AUC_{（0-24小时）}和C_最大值比例分别为1:3. 5:11.51和1:2. 9:7.42。少数动物在≥6mg /kg/day时，胸腺淋巴细胞耗竭的严重程度略有增加，而在≥6mg /kg/day时，主要在雌性动物中观察到肾上腺非特异性体重增加，这与应激一致。在每日剂量≥6 mg/kg的男性中，前列腺重量(绝对重量和相对于身体和脑重量)的增加与睾丸重量和成熟程度的增加相关，并被认为与性成熟的变化有关，而与KBP-5074无关。综上所述，KBP-5074在公犬和母犬中的NOAELs分别为6和2 mg/kg/d。相应的AUC_{（0-24小时）}和C_最大值第28天6 mg/kg/天时，雄性大鼠的KBP-5074浓度分别为3087 ng·h/ml和287 ng/ml，雌性大鼠的KBP-5074浓度分别为2877 ng·h/ml和460 ng/ml

安全药理学研究

灌胃对SD大鼠中枢神经系统功能的影响:结果表明，KBP-5074固体分散体单次灌胃给药后4、24和48 h，与对照组相比，给药后1、3和10 mg/kg剂量对SD大鼠中枢神经功能无任何药物相关影响。SD大鼠单次灌胃KBP-5074固体分散剂对中枢神经系统的作用NOAEL≥10 mg/kg(最高剂量)，表明KBP-5074似乎没有任何潜在中枢神经系统作用。

对有意识比格犬心血管和呼吸功能的影响:没有治疗相关的统计变化、趋势的变化,或在这些参数观察个人数据异常剂量范围相比pre-dose(1小时)和车辆控制值(表6和7)。此外,没有性别差异反应观察到由于测试文章。结果表明，KBP-5074固体弥散剂以0.6、3或15 mg/kg剂量单次灌胃给神志清醒的比格犬，对心血管或呼吸系统功能无任何药物相关影响。KBP-5074固体弥散对意识犬心血管和呼吸系统功能的NOAEL≥15 mg/kg(上剂量)，提示KBP-5074未表现出潜在的心血管或肺影响。

剂量/ 时间点	0	0.6毫克/千克	3毫克/千克	15毫克/公斤
1 h	71.4 ± 14.6*	65.0±15.2	70.9 ± 17.0	72.1±10.8
0.5小时	75.1±18.1	67.9 ± 16.9	72.8 ± 13.9	77.9±12.2
1 h	67.3±11.6	64.6±11.3	69.8±11.1	72.4 ± 5.3
2 h	75.1±15.3	73.3±14.0	74.9 ± 16.6	76.0±12.0
3 h	71.5 ± 13.3	72.8 ± 13.9	66.0 ± 5.1	79.5±17.7
4 h	73.8±17.2	77.8±18.1	81.8±15.6	82.1±19.7
6h	74.6±14.0	76.5±18.2	76.0±18.6	82.3±18.3
8h	91.6±11.3	92.0 ± 10.0	88.1±15.1	92.9±8.7
12小时	95.1±10.6	88.0 ± 14.9	87.9±13.2	96.5 ± 10.9
24小时	77.3±25.9	73.5±14.2	77.0 ± 18.4	72.0±14.7

表6:kbp -5074对犬心率影响的总结。
*节拍/分钟，(X SD±，N=8)。

剂量时间点	0	0.6毫克/千克	3毫克/千克	15毫克/公斤
-1小时	92.22 ± 10.13*	92.93±6.22	95.41 ± 5.32	96.49±6.38
0.5 h	91.75±6.93	90.58 ± 4.12	90.05 ± 6.18	90.38±5.83
1 h	91.53±5.95	90.09±6.50	89.87±7.42	90.97±5.35
2小时	96.71 ± 10.55	97.99 ± 7.99	91.98 ± 5.49	98.08±6.87
3 h	94.07 ± 9.89	92.83±8.41	95.37±5.10	90.18 ± 5.13
4 h	95.92±5.32	93.32±11.09	93.54 ± 6.80	97.66 ± 9.49
6小时	89.71 ± 9.16	92.76±6.67	91.90±5.66	91.66±10.99
8 h	93.81±6.91	92.58±6.78	94.14±5.50	94.74 ± 10.21
12小时	88.46 ± 10.28	93.33 ± 6.20	95.30 ± 6.92	94.67 ± 11.13
24小时	94.57 ± 9.73	94.14±9.21	94.33 ± 9.64	95.21±4.78

表7：KBP-5074对犬平均动脉血压影响的总结。
*mmHg (X SD±，N=8)。

体外hERG试验:KBP-5074 (1- 30 μ M)能抑制通过中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中稳定表达的克隆hERG钾通道的电流。在最高浓度下，平均抑制率为34.2%₅₀值≥17µM。

讨论和结论

体外基因毒性研究表明，KBP-5074既无致突变性，也无致裂性。小鼠微核试验显示，与对照组相比，KBP-5074给药后24小时，雌雄小鼠微核发生率均无明显增加。然而，在给药后48小时，高剂量组男女的微核发生率均显著增加(P≤0.05)。由于3%的增加在内部历史对照数据和已发表的CD-1小鼠[15]的平均自发微核频率范围内，因此认为这些增加没有毒理学意义。根据这些体外和体内试验结果，得出了KBP-5074不会对人类造成遗传毒性或致癌危害的结论。

KBP-5074在600mg /kg剂量下对SD大鼠和Beagle犬的急性口服毒性无明显临床表现。结论:KBP-5074在大鼠和犬体内的最大耐受剂量(MTD)≥600 mg/kg。在关键的为期4周的口服大鼠研究中，在雄性和雌性大鼠中没有观察到明显的临床毒性迹象。第29天，雄性大鼠口服KBP-5074，剂量为20 mg/kg/d，未观察到任何临床化学参数的显著变化。然而，在第29天，雌性大鼠血浆钾浓度在20mg /kg/d时出现升高。钾水平的性别差异是由于雌性大鼠口服后血浆KBP-5074浓度比雄性大鼠高2-3倍。在为期4周的犬类研究中，在剂量为20 mg/kg/d的任何动物中，均未发现明显的毒性临床症状、体温、心电图、尿液分析、眼科检查、血液学和临床化学参数(包括钾)的变化。KBP5074在雄性和雌性犬体内的浓度与雄性大鼠相同剂量口服后的浓度相当，但明显低于相应剂量雌性大鼠的浓度。KBP-5074口服剂量达20 mg/kg/d后，雌雄犬的毒性动力学参数无性别差异。

依普利酮是继螺内酯后第二种口服醛固酮拮抗剂，可用于治疗动脉高血压和心力衰竭。应用依普利酮治疗心力衰竭患者可降低血压，提高生存率。然而，螺内酯最常见和不受欢迎的副作用，即高钾血症，也被报道与依普利酮[16]。最近，三种非甾体mra与甾体mra相比，证明了高血钾治疗指标的改善。Esaxerenone (CS-3150)是另一种口服非甾体MRA，目前正在进行临床试验，用于治疗原发性高血压和心肾疾病[17,18]。在DSS大鼠高血压模型中，CS-3150以剂量依赖性的方式预防收缩压升高，且无高血钾[18]。Finerenone是第三代MRA，在CKD[19]患者中显示出显著降低UACR且无高血钾。值得注意的是，KBP-5074以20 mg/kg/d口服4周后，仅在雌性大鼠中观察到血浆钾水平升高。KBP-5074在大鼠TK/代谢方面存在明显的性别差异。C_最大值和AUC在女性中显著高于男性。无处理恢复期后，血浆钾浓度的变化是可逆的。

SD大鼠单次灌胃KBP-5074 1、3、10 mg/kg，观察KBP-5074对中枢神经系统的影响。结果显示，与对照组相比，单次灌胃10mg /kg剂量的KBP-5074在给药后4、24和48小时对中枢神经系统功能没有任何药物相关影响。NOAEL≥10 mg/kg。通过将KBP5074单次灌胃给神志清醒的Beagle犬(剂量为0.6、3和15 mg/kg)，评估KBP5074对心血管和呼吸系统的影响。结果显示，KBP-5074单次口服给有意识的Beagle犬，剂量高达15 mg/kg，对心血管和呼吸系统功能没有任何药物相关影响，NOAEL≥15 mg/kg。的集成电路₅₀kbp - 5074体外hERG含量≥17µM，是其≥1000倍体外敌对的活动(集成电路₅₀: 2.7 nM)在重组人MR[1]上。Redfern[20]回顾了临床前心脏电生理学和许多药物扭转点之间的关系，并得出结论认为>30- 100倍的安全边际在药物开发中是足够的。

总之，根据上述研究结果得出结论，KBP-5074的临床前安全性概况将支持首次人体内（FIH）研究。KBP-5074诱导的毒性是剂量依赖性的，在停止治疗后是可逆的。首次提出的临床研究将是健康受试者的1期单次递增剂量（SAD）研究，以评估递增单剂量口服KBP-5074后KBP-5074的安全性、耐受性和药代动力学。本SAD研究的建议临床剂量为0.5、1.0、2.5、10和20 mg。在为期4周的研究中，雄性和雌性大鼠中KBP-5074的NOAEL为6 mg/kg/天，换算成人体等效剂量（HED）为0.97 mg/kg。在为期4周的研究中，雄性和雌性狗体内KBP-5074的NOAEL分别为6和2 mg/kg/天。相应的人体等效剂量（HED）分别为3.33和1.11 mg/kg。假设每个受试者的平均体重为60 kg，并使用FDA工业指南[21]推荐的换算系数（Km），使用4周大鼠研究得出的HED为0.97 mg/kg，建议临床剂量为0.5至20 mg的安全范围为2.9至115倍。基于4周的狗研究，KBP-5074的安全裕度甚至更高，因为NOAEL和HED值高于4周大鼠研究得出的值

确认

本论文的初步结果于2018年3月11日在德克萨斯州举行的毒理学学会年会上公布。本研究未收到公共、商业或非营利部门资助机构的任何特定资助。作者声明没有利益冲突。

补充数据

本文的补充信息(附录A、B、C和D)可以随此文件一起找到。

工具书类

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条信息

物品类型：研究文章

引用:周国平，刘小军，谭晓杰，杨F，黄志（2018）用于治疗心肾疾病的新型非甾体盐皮质激素受体拮抗剂KBP-5074的临床前研究。药物研究进展4（2）：dx.doi.org/10.16966/2470-1009.143

版权:©2018 Chow CP等。这是一篇根据知识共享署名许可证条款分发的开放获取文章，允许在任何媒体中不受限制地使用、分发和复制，前提是原始作者和来源均已获得授权。

出版历史：

收到日期：04 2018年6月,

接受日期:2018年6月27日

发表日期:2018年7月3日,