摘要

客观的：本研究的目的是使用液相色谱（LC）使用多孔层通过苯乙烯和二乙烯基苯共聚形成的核心壳技术柱来确定通过液相色谱（LC）来快速定量包装醇（PA）的条件。

方法:将PA溶于乙醇中，连续稀释。采用绝对校正曲线法，根据各色谱峰面积的比值制备了校正曲线。用标定曲线计算检出限(DL)和定量限(QL)。

结果:以流动相CH为流动相，采用高效液相色谱法测定PA_3.CN/Hexane/H₂O(67/3/30)，波长为205 nm。PA峰值出现在保留时间10.8分钟，分离度为4.5。在此条件下制备的标定曲线相关系数为R>0.997，线性度良好。采用该曲线计算的定量限和检出限分别为2.08µg/mL和6.31µg/mL。

结论:比较HPLC和GC对PA的定量速度，HPLC比GC更有用，因为它需要一半的时间来测量。PA量化方法的改进将使旨在扩大PA使用范围的研究能够更快地进行

关键词

广藿香醇;液相色谱;核心壳柱;量化

介绍

广藿香(广藿香）是Lamiaceae家族的植物，用作香味。用于香味和化妆品的广藿香精油的主要组成部分是Poprolouli醇（PA;图1），其是三环倍萜醇[1]。据报道，据报道，PA通过抑制炎症[2]的介质，通过抑制基质金属蛋白酶（MMP）-1和MMP-3 [3]，以及抗菌活性来抑制炎症[2]的抗炎症效果，反对通过抑制脲酶[4]通过幽门螺杆菌[4]。

图1：考评的结构

香味的主要成分的定量通常是通过气相色谱(GC)来实现的。气相色谱还用于分析挥发性有机化合物，如PA[5]。气相色谱法不适用于非挥发性药物和对热敏感物质的分析。但对于挥发性药物的分析，它是一种分辨率高、检测灵敏度高的通用分析方法。然而，气相色谱法测定PA的时间约为25min[6]，因此作为一种简单的分析方法可以加以改进。

最近，在液相色谱（LC）中使用核壳柱进行了定量分析[7]。核壳柱中的填料并非完全多孔，而是在柱的中心有一个由多孔层包围的实心芯。由于核壳柱的中心有一个硬核，溶质的纵向扩散受到抑制。柱外侧的多孔层产生较短的扩散距离，因为它很薄。与传统的全多孔色谱柱相比，核壳色谱柱具有分辨率更高、分析时间更短和背压更低的特点。核壳色谱柱用于分析碳水化合物和氨基酸，预计特别适用于食品和香料领域。

为了量化PA，是必要的，因为PA缺乏发色团以测量。另一方面，据报道，含有肉类中含有的萜烯药物的甘氨酸，可以使用LC与核心壳柱进行定量测量[8]。因此，本研究的目的是研究使用LC与核 - 壳柱定量PA的条件，其多孔层通过苯乙烯和二乙烯基苯共聚形成。

材料和方法

试剂

PA由印尼Malya Optima捐赠。HPLC级乙醇(TWN2116批次)和乙腈(TWN2635批次)购自Wako Pure Chemical Co.， Ltd。特级己烷试剂购自瓦科纯化工有限公司其他标准试剂购自Wako Pure Chemical Co.。

定量条件

气相色谱测定条件:采用岛津公司的GC-2010 Plus仪器和Rtx-1 (30 m × 0.25 I.D. × 0.25µm)色谱柱进行气相色谱测定。将柱温从55℃提高到134℃(15℃/min)，保持5min，然后将柱温从134℃提高到143℃(1℃/min)。再次保持5分钟后，将温度由143°C提高至230°C(10°C /min)，保持1分钟。注入器和检测器的温度均设置在250°C。载气为氮气，流速为1.3 mL/min。采用火焰离子化检测器(FID)检测。

HPLC测量条件：使用核心壳型多孔聚合物（4.6mm（即）×150mM（L））柱进行联盟分离模块E2695仪器（水）进行HPLC测量。多孔层通过在芯的表面上的苯乙烯和二乙烯基苯的共聚合而没有交换基团形成。苯乙烯与二乙烯基苯的聚合比为60/40。柱温设定在40℃。流动相由乙腈/己烷（97/3，v / v）或乙腈/己烷/水（67/3/30，v / v / v）组成。流速设定为1毫升/分钟。UV /可见检测器2489用于检测205nm和210nm的波长。

GC和HPLC的检测限量和定量限制计算

PA经乙醇溶解后，HPLC和GC分别从56.5µg/mL和61.5µg/mL稀释。采用绝对校正曲线法，根据各色谱图的峰面积比制备了校正曲线。用各自的标定曲线计算出检出限(DL)和定量限(QL)。

DL = 3.3s/a (eq.1)

QL = 10s / a（eq.2）

年代;空白样品的标准差

一个;校正曲线在检测极限附近的斜率

结果与讨论

GC的PA测量

通过GC测量PA，测量时间为34分钟，在23分钟时观察到PA峰值（图2）。该结果与先前报告的结果相似[9]。

图2：校准曲线
1)高效液相色谱法;CH_3.CN/Hexane/H₂o（67/3/30），205 nm
GC b)

HPLC条件调查（图3）

在HPLC上使用流动相乙腈/己烷（97/3）和波长210nm，在7.6分钟的7.6分钟观察PA的峰值，分离程度为2.0（图3a）。溶剂峰在PA峰附近出现宽​​度，产生重叠，从而导致分离程度差。为了改善PA和其他峰之间的分离，考虑流动相和波长。

图3:使用HPLC获得的色谱图
一)CH_3.CN/己烷（97/3），210 nm
b）ch._3.CN/Hexane/H₂O（67/3/30），210纳米
c) CH_3.CN/Hexane (97/3)， 205 nm
d) CH_3.CN/Hexane/H₂o（67/3/30），205 nm

将流动相改为乙腈/己烷/水（67/3/30），并在210 nm波长下进行测量。在10.1分钟时观察到PA峰，分离度为4.4（图3b）。水的加入增加了流动相的极性，延迟了PA峰的出现。然而，在这些条件下，基线受到干扰，因此被认为不适合量化。接下来，使用流动相乙腈/己烷（97/3），将波长更改为205 nm。在8.1分钟时观察到PA峰，分离度为2.2（图3c）。PA峰比波长为210 nm时更尖锐，但溶剂峰继续与PA峰重叠。这也被认为不适合量化。因此，使用流动相乙腈/己烷/水（67/3/30）进行测量，测量波长为205 nm。在10.8分钟时观察到PA峰，分离度为4.5（图3d）。该条件更可取，因为基线未受干扰，PA峰未与溶剂重叠。

GC、HPLC检出限和定量限计算(图4)

用已知浓度的PA溶液制备了标定曲线。气相色谱校正曲线相关系数为R>0.987，具有足够的线性关系(图4a)。使用此校准曲线估计DL和QL分别为1.63 g/mL和4.94 g/mL(表1)。从乙腈/己烷/水(67/3/30)流动相在205 nm波长下的HPLC校准曲线的相关系数为R>0.997，具有充分的线性关系(图4b)。使用此校准曲线估计DL和QL分别为2.08 g/mL和6.31 g/mL(表1)。

图4:校准曲线
1)高效液相色谱法;CH_3.CN/Hexane/H₂O = 67/3/30, 205 nm
GC b)

	检出限(µg / mL)	定量限制(µg / mL)
条件	3.3 s /	10 s / a
GC	1.63	4.94
高效液相色谱法(CH3.CN/Hexane/H2O = 67/3/30)	2.08	6.31

表1:检测限制和定量限制
s:空白样品的SD
a:校准曲线接近检测限的斜率

PA的GC定量时间为34分钟，LC定量时间为15分钟。LC中PA的定量条件为乙腈/己烷/水（67/3/30）的流动相在205 nm波长下测量。在灵敏度和范围方面，GC和LC基于相似的DL和QL值是等效的。LC对PA的定量分析显示出与GC相同的检测能力，一般认为GC具有优异的检测能力。LC分析方法比GC更简单，使用核壳colu嗯。

对18种中草药和食品样品中常见的掺假成分进行了定性和定量分析，结果表明，核壳柱与整体柱和标准3.5 μ m-粒径色谱柱的分离效果最好。采用核壳色谱柱对葡萄中的主要多酚进行了快速定量，并对其进行了质量控制。黄曲霉毒素B的测定₁采用核-壳色谱柱对原料奶中所含成分进行分析，使原料奶的加工更加容易。在此基础上，核壳柱可广泛应用于无特异性发色团药物的定量分析。当HPLC和GC在速度方面进行比较时，HPLC需要一半的测量时间，这使得它比GC更有用。

然而，在该LC条件下，己烷包括在流动相中，并且可以将LC泵暴露于它。与LC相比，通过GC的量化在不需要移动相的制备中是有利的。因此，需要继续探索简单且易于定量的方法。

结论

使用核壳柱的LC测量大大缩短了测量时间，使PA在短时间内定量成为可能。通过改进PA的量化方法，扩大PA的使用范围的研究应加快进行。

确认

作者感谢Malya Optima Indonesia提供PA。

利益冲突

作者宣布没有关于本文的出版物的利益冲突。

参考文献

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条信息

文章类型:简短的沟通

引用:Inoue Y，Komiya N，Murata I，Mitomo S，Negishi Y等。（2017）使用核心壳柱的HPLC分析PAMPOULI醇。J药物RED 3（3）：DOI http://dx.doi.org/10.16966/2470-1009.135

版权:©2017 Inoue Y等。这是一篇根据知识共享署名许可证条款发行的开放获取文章，允许在任何媒体中不受限制地使用、发行和复制，前提是原始作者和来源均已获得授权。

出版历史记录：

收到日期:05年8月2017年

接受日期:2017年8月24日

发表日期:2017年8月30日