抽象的

为掌握科学知识，本研究采用乙酸乙酯和乙醇提取物的根、叶、茎评价天然产物的抗癌、抗微生物、药理活性及细胞毒效ClerodendRumin fortunatum.(马鞭草科)由于在习惯和传统药物中随机使用，治疗常见的疾病，如肠道疾病、腹泻、结核病和呼吸系统疾病等。的在体外使用盐水虾致死性生物测定的台脚顶部生物测定法进行施用。发现粗提取物是致命的，并且特别有效地表明了LC_50.与标准药物四环素相比，乙醇分数的根部值为20.845ppm为盐水虾Nauplii的标准药物四环素，表明提取物是生物学活性的。中位致死浓度的细胞毒性研究（LC_50.）值表明与抗生素四环素的良好相关性。对比较相关误差条和百分比乙醇级分的根提取物非常有效，并且乙酸乙酯和乙酸乙酯级分的叶片提取物显着效果。本研究用作这些结果对生物活性和药物发现的影响的潜在模板。

关键字

民族医学;半数致死浓度;细胞毒性;Artemiasalina;标准偏差

介绍

利用传统医学从业人员的土著知识作为线索，为寻找新型药物[1]提供了一条有用的途径。不同药用植物的抗菌潜力在世界范围内得到了广泛的研究，但系统的研究还很少。来自传统社会的医学知识激发了对从植物中提取的新的生物活性分子的探索，这些分子对细菌病原体[3]具有强大的活性。现在，一些研究人员正在进行实验室试验，以证明在民间医药中使用这些植物治疗各种传染病是合理的。

在本研究中，c . infortunatum马鞭草科(马鞭草科)是一种被广泛用于治疗肠道疾病、腹泻、肺结核和呼吸系统疾病的传统药物，因此选择其作为民族植物学的重要研究对象。据报道，孟加拉国有超过5000种药用植物，这些植物的药用用途是显著的。c . infortunatumis一般用于民俗，山丘和农村贫民窟居民作为土着医药，食品补充剂，装饰家用电器和木柴[6,7]。Clerodendrum是一个非常大，不同的属，直到现在已经确定了五百八十种的属，并广泛分布在亚洲，澳大利亚，非洲和美国[8]。根和叶提取物c . indicum，c . phlomidis，C. Serratum.，c. trichotomum，c. chinense和c . petasites已被用于治疗风湿病，哮喘和其他炎症疾病[9]。还报告了部落使用c . inerme作为鱼、蟹、蟾蜍的解毒剂。根、叶和鲜汁的叶c . infortunatum用于消除蛔虫和肿瘤，也作为泻药[11]。另一个研究c .摘要和c . splendens有报道称，花和茎的氯仿提取物对恶性疟原虫和鲁兹锥体暗示叶子提取物表现出有希望的活动t . cruzi[12]．

为了探索一个科学的想法，本研究旨在在体外对其细胞毒效力进行评价，进行了盐卤蒿、卤虾的生物致病性鉴定和化学结构的测定。

材料和方法

植物采集与鉴定

从孟加拉国的拉贾莎莉大学校园收集了植物标本。鉴定凭证标本，在孟加拉国拉吉山大学植物学系分类科分类科。

准备的提取

根，叶和茎在阴影中干燥并储存在棉袋中，然后在研磨机的帮助下分别用粉末（100mg）。将每个接地材料浸泡在500ml乙醇和乙酸乙酯中24-72小时并过滤（Whatman No 1）。然后使过滤器蒸发在旋转蒸发器中，直至完全干燥并保持在冰箱中。然后（100mg和50mg）干燥的提取物，进行进一步研究，称重并溶解在10ml受抚养的溶剂中以稀释。最终提取物的浓度为100μg/10μl和50μg/10μl。

体外细胞毒性生物测定

盐水虾致死性生物测定是评价天然产物抗癌、抗菌和药理活性的一种台式生物测定方法[13,14]。在这里，一种简单的动物生物(盐水虾无节体)的体内致死率被用作一种方便的监测手段，用于筛选发现新的生物活性天然产物的分馏物[15,16]。一般而言，中位有效剂量(ED_50.细胞毒性←)值为半数致死剂量(LD)的十分之一(1/10)_50.)的值在盐水虾试验[17]。因此，可以利用[18]检测和监测细胞毒性以及3PS (P388)(鼠白血病体内)活性提取物。生物活性化合物在高剂量时几乎总是有毒的。根据美国国家癌症研究所(NCI)的研究，如果一种植物粗提取物在哺乳动物细胞上的CC50值<30µg/mL[19]，则认为其具有细胞毒性。另一方面，认为植物粗提取物无毒的卤水虾毒性测定的分界点是LC_50.> 100µg / mL(20、21)。对盐水虾的毒性与对9KB(人鼻咽癌)的细胞毒性呈正相关(P=0.036, kappa=0.56)，与中位致死浓度(LC)呈正相关_50.)小鼠急性口服毒性试验(r=0.85;(22、23)P < 0.05)。

咸水虾孵化

在模拟海水中孵化少量盐水虾卵。将约38克纯NaCl(又称海盐)溶于1升蒸馏水中，制成模拟海水。pH值应为8.3-8.7。然后将收集的少量虾卵释放到水中，并在孵化槽上进行持续通风供氧。还保证了一个连续的照明系统。

试样制备

乙醇和氯仿馏分c . infortunatum对盐水虾Nauplii施用根，叶和干液。最初，将每个部分的2mg萃取物分别溶解在100μl纯二甲基亚砜（DMSO）中，在加入19.98ml水之前进行亲水性，得到200ppm的每种用作储备溶液-A的浓度。从储备溶液中取出10mL（浓度为200ppm）并用盐水稀释至20ml以获得100ppm的浓度，并且这表明储备溶液-B和储备溶液B，将10mL取（浓度为100ppm）并用盐水稀释至20mL，得到50ppm的浓度，用于制备储备-c-c。这称为串行稀释方法。然后进行200,100和50ppm的以下浓度。在根据剂量造成的效果的实验期间，由于萃取症对盐水虾Nauplii的活性为活性，因此对多血型产生的效果进行了不同的效果。

对照组的准备

每一浓度以同一体积的DMSO用海水稀释至10 ml, 30只虾无节幼体作为阴性对照组。并用该方法验证了试验的有效性。当对照的无节体表现出快速死亡时，则认为试验无效，因为无节体死亡可能是由于化合物的细胞毒性以外的原因。

试验样品和盐水虾无节体在试管中的应用

在每一个试管中，取10 ml盐水虾液(3.8%)，含30个盐水虾无节幼体，用微管，将每个样品的特定体积从原液- b转移到各自的小瓶中，最终浓度为200，100µg/ ml和50µg/ ml。试管中DMSO的体积不应超过10µl/ ml的盐水溶液，因为超过这个浓度的DMSO可能会产生毒性。

计算的无节幼虫

24小时后，观察试管。计算每个试管中存活的Nauplii的数量，并注意到结果。由此，在每个样品的每种浓度下计算盐水虾Nauplii的死亡率的百分比，结果表明了结果。

统计学分析数据

剂量死亡率数据采用Probit分析[24]进行统计学分析。的effectiveness or the dose mortality relationship (concentrationmortality relationship) of plant product is usually expressed as a median lethal concentration (LC_50.)值。这表示在一定的接触时间后，半数测试对象死亡的化学物质的浓度。

结果

介绍了盐水虾致死性生物测定的结果。根，叶和茎的乙醇和乙酸乙酯提取物c . infortunatum是针对咸水虾(答:盐水湖)，以检测其生物活性。通过中试(特设)试验选择若干剂量，并设置3个重复和对照剂量的最终试验。从实验中可以看出，在不同的浓度下，每个测试样品的死亡率都是不同的。随着粗提物浓度的增加，盐渍虾无节体的死亡率增加。LD的_50.采用Probit分析测定粗提物(根、叶、茎)和四环素暴露24 h的95%置信限、回归方程和卡方值。结果已列于表1。通过绘制提取物浓度的对数绘制的回归线c . infortunatum与probit死亡率的关系揭示了对数剂量与经验probit死亡率之间的线性相关性(图1-3)。

LC._50.根、叶、茎分别为20.845、24.017、31.379 ppm，乙酸乙酯分别为33.448、48.083、24.882 ppm，四环素为14.675 ppm(表1)。

根、叶、茎的95%置信限分别为:乙醇5.335 ~ 81.447,6.361 ~ 90.675,11.543 ~ 85.303，乙酸乙酯14.017 ~ 79.033,26.302 ~ 87.898,8.161 ~ 75.856，四环素2.118 ~ 101.678(图1)。

根，叶和茎的回归方程是Y = 3.123247 + 1.445058x，Y = 3.066222 + 1.395237x和乙醇的y = 2.783323 + 1.461687x（图2a-2c），y = 2.335113 + 1.710795x，y = 2.121780+ 1.710795x和y = 2.760945 + 1.594544x分别用于乙酸乙酯（图3A-3C），而Y = 3.532138 + 1.278944x用于四环素（图1）。

乙醇，0.008432和0.008245的根，叶和茎0.111416,0.00843,0.008245分别为乙酸乙酯0.004743,0.064644和0.021533，四环素具有1点自由度（表1）。中位数致死浓度（LC_50.)与标准抗生素四环素进行细胞毒性生物测定，并与相关误差柱和百分比进行比较(图4)。

发现所有粗提取物都被发现是致命的，并且对于盐水虾Nauplii而言表明提取物在生物学上活跃的情况下显着有效。

讨论

从本研究中，盐水虾Nauplii的死亡率随着测试粗提物的浓度的增加而增加。LC._50.发现根，叶和茎的粗提物的值是20.845,24.017和31.379ppm的乙醇;分别为乙酸乙酯的33.448,48.083和24.882ppm，四环素的14.675ppm。95％的置信限制，回归方程和χ2值也显着。这是普通协定[25,26]谁研究了偏戟属HIRTA的致死性试验。记录的细胞毒性观察到盐水虾Nauplii也支持我们以前的抗菌活性c . inforunatum(-),c . viscosum[30]。连续的研究链进一步体现了我们早期的杀虫、驱避和致死活性的研究结果c . inforunatum[31,32]。

表1:咸水虾的致死率生物测定c . infortunatum提取

图1:盐虾无节幼体的Probit死亡率与log剂量(+ 1mgcm)的Probit回归线^－2四环素暴露24小时后

图2:盐虾无节幼体的Probit死亡率与log剂量(+ 1mgcm)的Probit回归线^－2）24小时暴露后乙醇提取物的根

图2 b:盐虾无节幼体的Probit死亡率与log剂量(+ 1mgcm)的Probit回归线^－2)，乙醇提取物24 h后

图2 c:盐虾无节幼体的Probit死亡率与log剂量(+ 1mgcm)的Probit回归线^－2)的茎部乙醇提取物24 h后

图3:盐虾无节幼体的Probit死亡率与log剂量(+ 1mgcm)的Probit回归线^－224小时暴露后乙酸乙酯提取物的根部

图3 b:盐水虾和对数剂量概率死亡率之间的概率回归线（+1 mgcm^－2)，乙酸乙酯B叶提取物24 h

图3 c:盐虾无节幼体的Probit死亡率与log剂量(+ 1mgcm)的Probit回归线^－224小时暴露后乙酸乙酯提取物的C茎

图4:比较中位致死浓度(LC_50.）相关误差栏和百分比

中位致死浓度的细胞毒性研究（LC_50.）值表明与抗生素四环素的良好相关性。最近，我们证明了乙醇和氯仿部分之间的细胞毒性相关性c . infortunatum用抗生素四环素[33]。从比较相关误差条和百分比，我们理解乙醇级分的根提取物非常有效。当然，乙醇和乙酸乙酯级分的乙醇萃取物的叶子提取物也显着地进行了重要性。细胞毒性证据表明提取物的生物活性性质c . infortunatum是由盐水虾致死生物测定结果得出的。然而，这种植物的潜在化学成分显示出杀菌、杀真菌或其他毒理学活性还有待鉴定。

结论

上述研究结果指定了c . infortunatum具有良好的生物学特性，是开发抗菌药物和生态友好型生物农药的有效材料。因此，本研究为进一步的先导化合物分离研究奠定了基础，从而可能为这些结果的意义和中药产品的药物发现潜力进行了讨论。

确认

Rajshahi大学生物科学研究所在孟加拉国人民共和国政府科学和信息与通信技术部的支持下，在孟加拉国人民共和国政府科学和信息与通信技术部的研究与发展(R&D)项目下，提供了实验室设施。Bitojopromo / sha-12 / goupro-8/2008/268。

利益冲突陈述书

我们声明我们没有利益冲突。

参考文献

1. Amusan OOG, Sukati NA, Dlamini PS, Sibandze FG(2007)一些斯威士兰植物药物及其成分。非洲生物技术6:267-272。［Ref。］
2. Arora DS, Kaur GJ, Kaur H(2009)茶和咖啡的抗菌活性:它们的提取物和制剂。Int J食物道具12:286-294。［Ref。］
3. Bocanegra-Garcia V，Del Rayo Camacho-Corona M，RamírezcabreraM，Rivera G，Garza-Gonzáleze（2009）植物提取物对低呼吸道的代表性细菌病原体的生物活性。BMC RES注2：95。[Ref。］
4. Kumar GS, Jayaveera KN, Kumar ACK, Sanjay UP, Swamy BMV，等(2007)印度药用植物对包括细菌在内的痤疮的抗菌作用。Trop J pharmaceuticals Res 6: 717-723。［Ref。］
5. Venkatanarasimman B, Rajeswari T, Padmapriya B(2012)叶粗提物的抑菌潜力Clerodendrum philippinumSchauer。int J pharm biol拱3：307-310。［Ref。］
6. Steane DA, Scotland RW, Mabberley J, Olmstead RG (1999Clerodendrum唇形科(Lamiaceae):其序列和全部证据。Am J Bot 86: 98-107。［Ref。］
7. (in 1995)属植物叶挥发油的化学分类学研究Clerodendrum(马鞭草科)原产于台湾。Bot Bull Acad Sin 36: 247-251。［Ref。］
8. Hazekamp A, Verpoorte R, Panthong A(2001)从泰国药用植物中分离一种支气管扩张类黄酮Clerodendrum petasites。j民族科政药78：45-49。［Ref。］
9. Panthong D, Kanjanapothi T, Taesotikul T, Wongcomea V, Reutrakul V(2003)抗炎解热特性clerodendrum petasites.摩尔。J民族科科医生85：151-156。［Ref。］
10. 4α-甲基-24β-乙基-5α-cholesta-14,25-dien-3β-ol和24β-ethylcholesta- 5,9 (11)， 22e-trien-3β-ol，固醇Clerodendrum inerme．Phytochem 63：415-420。［Ref。］
11. 姜dg，李ys, Kim HJ, Lee YM, Lee HS(2003)。抑制血管紧张素转化酶的苯丙苷Clerodendron trichotomum．J民族科科医生89：151-154。［Ref。］
12. 姜卡，布HD，李勇，等(2004)水韭皂苷D的抗氧化活性clerodendrum trichotomum．Biol Pharma Bull 27: 1504-1508。［Ref。］
13. (2002)盐渍虾:一种简便的植物活性成分测定方法。Planta Med 45:31 -34。［Ref。］
14. 一种用于测量化学物质毒性和修复的盐水虾生物测定方法。J Chemedu 76: 1689-1691。［Ref。］
15. Hasanat A，Jakaria M，Tarek Mi，Chowdhury Ta，Arifujjaman，等。（2015）Macaranga甲醇提取物的盐水虾致死性和溶栓活性的生物测定。J Pharmacog Phytochem 3：43-46。［Ref。］
16. Khatun A, Rahman M, Akter A, Islam S, Akter M, et al. (2014) Macaranga indica Wight Ic(大戟科)树皮的生物活性。World J Pharmac Res 3: 172-182。［Ref。］
17. Haque M，Begum Mm，Hasan M，Rahman Afmt，Hussain Mi，等。（2015）对汉族吉斯（L.）提取物和分离化合物表征的调查。AME J BIO SCI 3：12-18。［Ref。］
18. Reyad-ul-Ferdous M, Alam TT, Islam MA, Khan MZI, Tasnim F, et al. (2014)体外云杉果实的心脏保护及细胞毒性筛选。生物医学6:219。［Ref。］
19. Fadeyi Sa，Fadeyi Oo，Adejumos Aa，Okoro C，Myles El（2013）在体外对24种当地使用的尼日利亚药用植物进行抗癌筛选。BMC补充Altern Med 13: 79。［Ref。］
20. Moshi MJ, Innocent E, Magadula JJ, Otieno DF, Weisheit A，等(2010)坦桑尼亚西北部Kagera地区一些植物的盐水虾被用作传统药物。中华医学会卫生科学分会。［Ref。］
21. Nondo RSO, Moshi MJ, Erasto P, Zofou D, Njouendou AJ，等(2015)坦桑尼亚Kagera和Lindi地区用于治疗疟疾的药用植物提取物的细胞毒性活性评估。中国医药科学(英文版)［Ref。］
22. Logarto Parra A, Silva Yhebra R, Guerra Sardiñas I, Iglesias Buela L.(2001)青蒿素测定方法与中等致死剂量(LD)估算的比较研究_50.在小鼠中，测定植物提取物的口腔急性毒性。植物医学内容8：395-400。［Ref。］
23. Sahgal G，Ramanathan S，Sasidharan S，Mordi Mn，Ismail S等人。（2010）盐水虾致死性和急性口腔毒性研究桃花mahagoni（Linn。）JACQ。种子甲醇提取物。Pharmacognosy Res 2：215-220。［Ref。］
24. 等(2011)黄芩提取物的杀幼虫、抑菌活性及对海虾的抑菌活性cissampelos mucronata.和Tephrosia Villosa.从坦桑尼亚海岸地区。BMC COMP ALT MED 11：33。[Ref。］
25. (1)海虾的致病性大戟属植物hirta林恩。Inter J Pharm Pharmac SCI 4：347-348。［Ref。］
26. Patil SB, Magdum CS (2011) LC的测定_50.的萃取值大戟属植物hirta林和Ouphorbia nerifolia利用盐水虾致死测定的Linn。亚洲j res pharm sci 1：42-43。［Ref。］
27. Waliullah TM，Yeasmin Am，Wahedul IM，Parvez H（2014）评估抗菌研究在体外大叶青的应用。中华热带疾病杂志4:484-488。［Ref。］
28. Waliullah TM，Yeasmin Am，Ashraful A，Wahedul Im，Parvez H（2014）抗菌性效力筛选Clerodendrum infortunatum林恩。int res j pharm 5：57-61。［Ref。］
29. Waliullah TM, Yeasmin AM, Alam A, Iskam W, Hassan P (2015)在体外用于生物评价的抗菌研究Clerodendrum infortunatum林恩。最近帕特抗感染药物发现10:98-104。［Ref。］
30. Oly Wt，伊斯兰W，哈桑P，Parween S（2011）抗菌活性clerodendrum粘膜发泄。（verbenaceae）。int JAgric Biol 13：222-226。［Ref。］
31. 陈志强，陈志强，陈志强，等clerodendrum粘膜发泄。（verbenaceae）反对种有害castaneum(Herbst)(鞘翅目:Tenebrionoidea)。Academ J Entomol 7:63 -69。［Ref。］
32. (2014)白藜芦醇的致死率和驱避活性clerodendrum粘膜发泄。（verbenaceae）反对Sitophilusoryzae(鞘翅目:象甲科)。Int J pharcog 1:25 0-257。［Ref。］
33. Waliullah TM，Yeasmin Am，Ashraful A，Wahedul IM，Parvez H（2015）盐水虾杀菌生物测定的盐酸毒性效力Clerodendrum infortunatum林恩。J沿海生活MED 3：J5-J50。［Ref。］

在此下载临时PDF

条信息

文章类型:研究文章

引文：Waliullah TM, Yeasmin MA, Alam MA, Islam MW, Hassan P(2016)生药毒性分析;药物研究进展2(2):doi: http://dx.doi.org/10.16966/2470-1009.116

版权:©2016 Waliullah TM等。这是一篇开放获取的文章，在知识共享署名许可协议的条款下发布，该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制，前提是注明原作者和来源。

出版的历史:

收到日期:2016年2月16日

接受日期:2016年3月23日

发表日期:2016年3月29日