摘要

本研究的目的是分析候选基因，Calpain10和脂联素等位基因体变异在我们在印度的离散糖尿病和Telangana州的离散糖尿病群体中遗传易感性遗传易感性的遗传敏感性的成熟作用。

在实现我们目的的情况下，找到先前报告的SNPs的存在，我们不仅可以发现报告的SNP的一致性我们还发现Calpain 10基因中的新单核苷酸多态性。

关键词

2型糖尿病（T2DM）;Calpain 10（Capn 10）;脂联素（adipoq）;单核苷酸多态性;风险因素

介绍

2型糖尿病

2型糖尿病(T2DM)的发展和相关并发症的进展是由于多种遗传、环境和生化危险因素的相互作用[1]。糖尿病在世界范围内各年龄组的患病率正在以惊人的速度增长，并对成人人群产生显著影响[2,3]。国际糖尿病联合会(International Diabetes Federation)在印度观察到的最大增幅为80%，生活在南部邦的人更容易患糖尿病，因为他们的生活方式特征“亚洲印度表型”使他们更容易患糖尿病[4,5]。一些生化[6]和遗传因子[7]与2型糖尿病的结局有关。

本研究是确定T2DM及其相关并发症的遗传和非遗传危险因素的病例对照研究的一部分。研究了7个基因的SNPs和生化参数，以发现这两个危险因素的个体和联合作用。

通过对研究开始时相关工作的研究，选择了之前报道的Calpain-10 [8-12] (CAPN10)和脂联素[13-17]的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)。

CAPN10

Calpain10基因[18]由半胱氨酸蛋白酶跨度66 kb的染色体2q37.3用15个外显子和编码。它的作用是在多种细胞功能的调节，并可能负责脂肪细胞分化。它的葡萄糖调节的作用是众所周知的。这是第一个，但不是最后一个候选基因通过定位克隆和基因组宽屏幕[19]识别易感性2型糖尿病。CAPN10的作用已被广泛的不均匀的效果[20-23]人口研究不同种族群体之间的检查。这是由于种群之间的遗传异质性。某些确认原发现，即单倍型组合，其包含内含子3 CAPN10单核苷酸多态性（UCSNP-43，-19，-63和）与2型糖尿病的风险增加有关，但有些没有。

ADIPOQ(24、25)

脂联素属于adipokines家族。它是adipoq基因的产物，它位于3q27染色体上。它是人类血浆中最丰富的主要脂肪细胞分泌蛋白，具有富含脂肪代谢和葡萄糖调控的有效作用。它包括肌肉和肝脏中的胰岛素敏感性，调节能量稳态和葡萄糖耐量。脂联素的低循环水平与肥胖和糖尿病有关。

材料和方法

样品收集

的用于常规血液检查测试受试者中遗留的外周血样品从诊断中心收集。他们要么自我激励的或由医生处方。每名受试者进行简单的问卷主要有病历。包括对样品进行年龄从安得拉邦和特兰伽纳国印度的15-85岁之间的糖尿病患者和正常健康受试者的。该研究的情况下，受试者建立了基于它们的生化报告其显示空腹血糖（FBS）超过126毫克/分升或≥7.0毫摩尔/ L的值和餐后血糖超过200的（PPBS）值糖尿病患者毫克/分升或≥11.1mmol / L（WHO糖尿病诊断标准）。该健康受试者与FBS和PPBS值小于上述值，并与作为对照糖尿病的家族史。

采用坐姿采集200名受试者外周血样本，分别采集EDTA和非EDTA两种不同的EDTA瓶。排除20例其他感染性疾病患者，纳入2型糖尿病治疗患者。最终共纳入180名受试者，其中女性96名，男性84名。

选择多态性

我们调查了CAPN10基因rs2975760[26]和rs3792267[27]的多态性以及ADIPOQ基因rs3774261[28]的多态性，并在我们的研究人群中进行了验证。

方法

在剩下的180份血液样本中，90份为糖尿病患者，90份为对照组。他们分析了CBP的不同生化参数和脂质谱，其中51个样品采用Sambrook等人的方案进行提取和纯化[29-31]。在使用裂解缓冲液和蛋白酶k裂解之前，白细胞组分在Tris洗涤液中与其他细胞组分分离，所有污染的红细胞和血清蛋白在裂解步骤中被去除。这些裂解的蛋白质用乙酸钠沉淀。通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction)从该分离纯化的DNA中扩增出与T2DM相关的具有特定SNP靶区的capn10和ADIPOQ基因[31,32]。PCR反应混合物由TaqDNA聚合酶、引物(正向和反向)、核苷酸和反应缓冲液组成。底漆喷砂工具进行底漆设计。对PCR条件进行了优化，以获得较高的特异性目的序列。PCR扩增产物在1.2%琼脂糖凝胶电泳[33]上进行定性检测，溴化乙锭染色后在透射镜下可见。然后用Sanger测序法[34]对扩增子进行测序。 The sequenced portions of the genes were checked for the consistency of reported mutations in our samples.

多态性分析

对这两个基因扩增部分的测序显示，在我们研究的一些糖尿病人群中存在SNPs。我们在29例病例中观察到CAPN10基因中存在rs2975760和rs3792267 snp。20例T2DM患者存在SNP rs2975760位点。20例T2DM患者出现C→T (Ala→Val)核苷酸及相应氨基酸变化。同样，在另外20例病例中，rs3792267 (SNP)中也发现了G→C (Val→Ile)的变化。

在17例T2DM患者中发现ADIPOQ基因rs3774261位点的核苷酸及相应氨基酸变化为A→G (Met→Ile)。13例T2DM患者的核苷酸及相应氨基酸A→G (Arg→Gly)发生新位置变化。CAPN10基因snp在对照中不存在。7例T2DM患者中均出现这3种snp(表1)。

图1:T2DM患者与对照组胎牛血清水平比较

图2:在2型糖尿病例和对照PPBS水平的比较

表1:单核苷酸多态性的位置

图1:CAPN10中新型snp的箱形阴影

讨论和结果

分析生物化学参数

这种情况控制观察性研究表明，禁食血糖值增加超过126mg / dL，与对照组相比，在2型糖尿病病例中观察到超过200mg / dl的折叠血糖值超过200mg / dl（谁标准或糖尿病）．

发现血糖水平分布的平均值是FBS 152±92.8 92±11.7和P = 0.8和PPBS 229.3±67.6 131.2±18.8 p = 0.7。禁食血糖和折叠血糖的比较显示为下面的图形表示在Graph1和图2中。

相关研究表明，大部分增加的血糖水平，空腹和葡萄糖的餐后水平的受试者的情况下，主题积极为SNP变异体进行了观察。作为这项研究测试的发现报道中离散糖尿病人群的SNP，我们可以发现在新位置的SNPs CAPN10 [35]，目前在我们的一些研究人群。SNP的糖尿病人群之间的分配如下所示，如图1所示新的SNP的在研究群体中的分布。

我们发现CAP10，AdipoQ基因型和代谢表型之间的重要关联。报告的SNP在Calpain 10和2型糖尿病中的脂联素的关联可以在我们的离散研究人群中成功复制。携带这些基因变体的正常个体可能面临更大的风险，如果具有超过糖尿病诊断的世卫组织推荐标准的值的血糖水平，则可能面临糖尿病的风险。

结论

我们得出结论，CAP10基因的遗传变异影响了非糖尿病受试者的血糖水平。这显示了糖尿病结果的多个因素的综合作用。在新位置发现的SNP可以是2型糖尿病的新生物标志物。然而，需要进一步分析更大的样本大小，以建立Capn10和Adipoq与Andhra Pradesh和Telangana，印度的糖尿病群体的结论性协会。

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条信息

文章类型:研究文章

引用:Cheekurhty AJP，Rambabu C，Kumar A（2016）验证与2型糖尿病相关的基因中的单核苷酸多态性。J Dia Res 2（1）：DOI http：//dx.doi。ORG / 10.16966 / 2380-5544.114

版权:©2016 Cheekurhty AJP。这是在创意公约归因许可的条款下分发的开放式访问文章，其允许在任何介质中不受限制地使用，分发和再现，只要原始作者和来源都被记入。

出版的历史:

收到的日期：2015年11月07

接受日期:2016年1月18日

发表日期:2016年1月25日