总结

本研究的目的是通过扫描电子显微镜(SEM)评估牙本质表面的超微结构形态后，使用口腔清洁产品。使用40颗健康的人类磨牙，牙冠在咬合第三段进行牙本质暴露。样品被嵌入化学活化的丙烯酸树脂中，在聚氯乙烯(PVC)管道获得的铸件中。表面处理是用56号硬质合金钻头进行的，钻头在高速旋转时产生了被称为涂抹层的残余涂层。按牙本质表面清洁方式随机分为6组(n=6): G1CO(对照)-10秒空气喷涂/水射流冲洗30秒/10秒空气喷涂;g2acf -磷酸用量为37%;g3cg -洗必泰凝胶应用2%;g4cl -洗必泰液应用2%;g5ac -柠檬酸用量20%;g6hs -次氯酸钠1%。 All specimens were fixed in chemical solution until SEM running. For SEM evaluation, the samples were dehydrated with ethanol, then gold-metalized and submitted to morphological analysis, less than 2000x magnification, evaluating the region’s cleansing. A qualitative comparison of the smear layer removal was performed for all studies groups through image analysis. The applied substances were responsible for the total or partial smear layer removal, and the ones which removed most of the dentin mud layer were the phosphoric acid at 37%, the liquid chlorhexidine at 2%, the citric acid at 20%, and the sodium hypochlorite at 1%.

关键词

扫描电镜；牙洞预备；酸蚀；洗必泰

介绍

每次需要进行龋齿预备时，无论是在牙齿患龋齿时，还是在进行修复预备时，都会形成残余物，并沉积在洞壁上，形成涂抹层[1]，这是Boyde a等人[2]从扫描电子显微镜（SEM）引入的术语分析。牙本质泥层由来自牙组织、唾液、血液和微生物的有机和无机成分组成[3]。此外，涂片层可能含有细菌及其副产物的混合物，因此建议去除[4]因为它会影响密封材料对齿壁的适应性[5]。

根据Pashley DH[6]的说法，牙本质泥是一种天然的牙洞保护剂，它可以消除牙本质小管，降低牙本质的渗透性，比任何商业化的清漆都更有效。另一方面，它会破坏牙体材料在牙本质上的适应或粘附，也会成为微生物及其产物的沉积，造成牙髓损伤。

因此，清洁口腔是基本操作时间序列的最后阶段，在这一阶段，除了减少微生物及其代谢产物外，还必须清除可能损害适应和边缘密封的残留物。这一行动不得导致牙本质槽的结构变化因此，牙本质的通透性没有改变，细菌入侵仍然很困难。

直到今天，关于一种化学物质在蛀牙准备后有效清洁蛀牙的迹象，仍然存在着各种各样的想法和意见。然而，众所周知，这一过程必须使用与牙本质-牙髓复合体[8]的生物学特性相兼容的材料进行。

一些物质已经被研究并表明可以促进牙本质组织的防腐[9-10]，如磷酸[11]、次氯酸钠[12];乙二胺四乙酸(EDTA)， 0,2-2,0%洗必泰[13]和氧化铝鼓泡[14]。

洗必泰(CHX)是一种众所周知的、非常流行的抗菌剂，可降低致龋细菌的水平。CHX应用于牙本质的腔面会影响粘接强度[13]。次氯酸钠(NaOCl)在根管治疗[4]中广泛应用于抗菌、润滑和去除涂片层有机残留物。磷酸、柠檬酸和其他有机酸被认为是去污剂[5]。

这些用于清洁口腔的冲洗液和用于修复的粘接剂系统影响粘结强度[14]。冲洗液与冠状牙本质接触，可改变牙本质的结构，从而影响后冠状牙体修复体的封闭。这些已经推荐的物质的联合使用也进行了评估。Ahir B, et al.[16]的研究中，使用扫描电镜比较了不同冲洗溶液清理和去除根管根尖三分之一涂片层的效率:2.5%次氯酸钠(NaOCl)， NaOCl与EDTA缔合为17%，NaOCl与柠檬酸缔合为10%，NaOCl与盐酸四环素缔合为1%。研究结果表明，柠檬酸和盐酸四环素与次氯酸钠相关的灌洗剂可作为EDTA的替代品。

从这个意义上讲，牙医在清除牙本质泥的空洞清洁过程中可能会使用大量化学物质，这使得正确的适应症变得困难。为了更好地阐明临床龋洞清洁方案，本研究的目的是在最终龋洞准备过程中采用不同的牙本质清洁方法后，使用扫描电子显微镜（SEM）对比分析牙本质表面的超微结构形态。

材料和方法

本研究由São José dos Campos牙科学院的伦理研究委员会(CEP/2.598.480)提交并批准。

标本制备

使用了从18-25岁的正畸患者中提取的40颗健康人第三磨牙。患者意识到其将用于牙科研究目的。这些牙齿通过生物材料捐赠的方式由诊所和私人机构捐赠。牙齿被清洁并保存在盐水溶液中，以防感染防止它们脱水，直到它们被利用。

在牙冠的第三咬合部分，用安装在旋转工具和高速旋转车床(Nevoni, São Paulo, SP，巴西)下的钻石盘(Dremel, Breda, Holland)切割牙冠，暴露牙本质表面。然后，用600砂纸(Fepa-P, Parambra, São Paulo, SP, Brazil)抛光牙本质表面，再配上圆形抛光机(DP-10, Parambra, São Paulo, SP, Brazil)，水冷却，旨在标准化表面纹理。

这些样品被嵌入一个圆柱形的硅铸件中，并使用透明的化学活性丙烯酸树脂(Jet-ClássicoSão Paulo, SP，巴西)。根状部分被埋入到无釉牙切面，而冠状部分暴露在外。

在最终连接到丙烯酸树脂后，用400粒度砂纸（Fepa-P，圣保罗，SP，巴西）打磨树脂块底座，以便压平。

使用#1094金刚石钻去除牙釉质，使用#56光滑圆柱形碳化钨（碳化钨）圆形切割仪（RCI），在旋转和冷却下进行表面处理，产生一层牙本质泥浆（涂抹层）.对于每个制备的样本，使用新的RCI，确保所有样本的制备条件相同。为了使操作员施加的压力标准化，使用了一个精密的刻度，他的手放在整个牙齿磨损表面上，注意所有样本的相同表面压力应用。表面处理后在耳鼻咽喉科，标本保存在蒸馏水中，以防止脱水，直至口腔清洁。

实验组

根据牙本质表面清洁方法，将标本随机分为六组（表1）。空洞清洁后，用水充分冲洗所有标本30秒。

组	腔清洗	应用模式
G1CO（n=4）	水/空气喷涂(控制)	10秒空气喷射干燥
		30秒喷水清洗
		10秒空气喷射干燥
G2AcF (n = 6)	37%磷酸(Ultra- etch, Ultra dent Products Inc.，犹他州，美国)	10秒空气喷射干燥
		30s酸敷
		30秒喷水清洗
		10秒空气喷射干燥
G3CG (n = 6)	洗必泰凝胶2%（美国犹他州Consepsis V-Ultradent产品公司）	10秒空气喷射干燥
		60秒用微刷在CLX上刷
		30秒喷水清洗
		10秒空气喷射干燥
G4CL（n=6）	2%洗必泰液体(美国犹他州康塞普西斯- ultradent Products Inc.)	10秒空气喷射干燥
		60秒用微刷在CLX上刷
		30秒喷水清洗
		10秒空气喷射干燥
G5AcC（n=6）	柠檬酸20%（美国犹他州柠檬酸Ultradent产品有限公司）	10秒空气喷射干燥
		60秒用微刷在物质中刷洗
		30秒喷水清洗
		10秒空气喷射干燥
G6HS（n=6）	氯化钠1%（Asfer Ind.Químicas有限公司-巴西南圣卡埃塔诺）	10秒空气喷射干燥
		60秒用微刷在物质中刷洗
		30秒喷水清洗
		10秒空气喷射干燥

表1：实验组分布。

扫描电子显微镜

在应用不同的空腔清理方法后，在双面金刚石盘（巴西圣保罗Microdont Micro Usinagem de Precisão Ltd.，圣保罗）的协助下，在无牙本质连接处切取标本，注意不要到达待评估区域，目的是作为劈裂的指南。然后，对样本进行外部清洗，并在凿子的帮助下，将牙齿劈开分成两半，将冠部与根部分开，然后丢弃。冠部固定在戊二醛化学溶液中，直到SEM评估时刻。样品在25%、50%、75%（各20分钟）、95%（30分钟）和无水乙醇（100%）中脱水一小时。然后，在室温下将试样放置在滤纸上，直到完全干燥（24小时）。

干燥后，为扫描电子显微镜（扫描显微镜-JSM-840A Jeol，日本东京）准备试样。为此，通过导电碳带和银胶将试样安装在金属短柱上，并使用高压蒸发器（DV-502-Denton NJ）使用薄金层（200Å）进行金属化.对于每个试样，将电子显微镜放置在大约25 mm的操作距离处；用15 V辐照200μm2的区域100 s，电子束穿透1μm。

通过扫描电镜观察到的涂片层的存在与否来进行空腔预备清洗确认。选取有代表性的区域，在2000倍的放大倍数下拍照。

两名独立的盲检人员对所有图像进行了评估。根据Ahir B等人的描述，对图像进行了定性评估，并对分数进行了归因。[16]：得分1：不存在涂抹层未检测到涂抹层，清洁且开放的牙本质小管；得分2：中度存在涂抹层未检测到涂抹层；但是，牙本质小管中含有碎屑；得分3：检测到涂抹层，封闭的牙本质小管，加重了涂抹层的存在。

结果

扫描电镜显微照片分析结果显示各组间存在质的差异。根据使用的牙本质清洁产品显示不同的涂层治疗模式。

大部分使用的牙本质清洁产品得分为1分，没有涂片层，牙本质小管干净开放。这些结果是在磷酸(G2AcF)、2%的氯己定(G4CL)、20%的柠檬酸(G5AcC)和1%的次氯酸钠(G6HS)处理组(图1A-1D)中发现的(图1A-1D)。

只有以2%的氯己定凝胶(G3CG)处理的组显示出与评分2兼容的模式，即没有检测到涂片层，但是，牙本质小管中含有碎片(图1E)。最后，对照组未使用牙本质腔清洁物质，观察到致密涂片层，牙本质小管阻塞(评分3)(图1F)。

可在图1中观察到显示不同图案的显微照片。

图1:扫描电镜（SEM）形态学评估牙本质空洞清洁不同方法的有效性（放大2000倍）。A） 1AcF组；B） 4CL组；C） 5AcC组；D） 6HS组；E） 3CG组；F） 第1CO组。

讨论

涂片层或牙本质泥是一种无定形的层，由在牙腔或牙髓治疗制剂[17]上形成的有机和无机成分组成。Luz MAAC, et al.[12]认为，涂抹层治疗对修复性能至关重要。Nakabayashi描述了这一事实，当时作者证明了混合层的形成尤其通过粘接剂系统在牙本质中渗透，机械粘接剂比化学粘接剂[18]更重要。另一方面，Nakabayashi N[19]描述了涂抹层治疗的护理是很重要的，因为牙本质的过度脱矿促进了胶原蛋白的变性，除了粘接剂不能像酸处理一样深入渗透的事实。

在本研究中，我们使用高旋转的尖端在牙体表面形成牙本质泥，Luz MAAC等人[12]和Götze Gda R等人[20]也使用了这种方法。对于这个目的，这种方法是有效的，因为在对照组中，用钻石尖切割，只用水/空气喷雾处理，根据曝光的显微照片，观察表面牙本质泥层的形成。在这组患者中，发现了牙齿表面的不规则性，这是由用于磨损的金刚石尖端引起的，Luz MAAC等人也描述了这一事实。

对于使用口腔清洁剂的其他组，观察到所有使用的清洁剂都会产生某种类型的牙本质泥去除。在用磷酸、2%的液体洗必泰、20%的柠檬酸和1%的次氯酸钠处理过的样本中，牙本质表面没有涂片层和开放的牙本质小管。在用2%洗必泰凝胶处理的样本中，也出现了涂片层的去除，但牙本质小管上的碎屑区域仍有一定的保留。

在口腔清洁测试产品中，根据文献，磷酸的应用是最为成熟的，它作为一种高效的口腔清洁剂，负责完全去除牙本质泥并打开牙本质小管，正如本研究中所承认的，在浓度为37%的情况下使用磷酸。在其他研究中也发现了这一结果，如Goes MF等人[21]的研究，他们使用了35%和10%的磷酸，并记录了牙本质泥的去除和小管的开放。同样，Luz MAAC等人[12]描述了使用磷酸彻底去除玷污层的过程，并告知磷酸对牙本质结构及其渗透性均有促进作用。

洗必泰是另一种常用的口腔清洁剂。根据Breschi L等人[22]，它的使用已经广泛传播，一旦它对牙本质的金属蛋白酶有抑制作用，事实上，根据小森PCP等人[23]有利于树脂复合修复的耐久性。观察到，当洗必泰以液体形式使用时，涂片层清除完全，牙本质小管暴露;然而，当以凝胶形式使用时，在小管中发现了碎片，这可能是因为凝胶去除牙本质泥的难度更大，考虑到使用的浓度是相同的。Neri JR等人的[24]也使用了2%的洗必泰凝胶，观察到它在去除牙本质表面的涂片层方面无效。

关于柠檬酸的使用，Götze Gda R, et al.[20]描述了其对乳牙牙本质泥的影响。在这种情况下，作者应用了不同浓度的柠檬酸(4%、6%、8%和10%)，与1%的次氯酸钠相结合。他们观察到，在所有浓度下，牙本质泥都被完全清除，这与本研究相印证。然而，作者得出结论，8%和10%的柠檬酸促进牙本质小管的扩大，提示对管周牙本质的损害。重要的是要强调研究格策Gda R,等。[20]使用次氯酸钠之前应用柠檬酸1%,和这一事实可能是负责牙本质小管口,而在这项研究中,1%的次氯酸钠独自负责牙质泥去除和开放的小管。在本研究的另一组样本(第5组)中，柠檬酸被分离使用。尽管在更大的浓度下使用，考虑到柠檬酸用量为20%，没有观察到损害。同样，Reis C等人[25]评估了1%、5%和10%柠檬酸对涂片层的影响，使用不同的涂抹时间(15s、30s、60s、180s和300s)。结果表明，柠檬酸作用发生在施用后15s，灌洗60s后出现管周侵蚀。去除牙本质泥的结果与本研究中观察到的结果相同，尽管应用浓度更高(20%)。 It is believed that it occurred for to the time of application being shorter (10s), matching concentration vs exposure period.

应用的物质负责全部或部分去除玷污层，去除大部分牙本质泥层的物质为37%的磷酸、2%的液体洗必泰、20%的柠檬酸和1%的次氯酸钠。

竞争利益

作者否认与本研究有关的任何利益冲突

道德认同

该研究此前已获得UNESP-São Paulo State University (São José dos Campos, Brazil)研究和伦理委员会的批准(CEP/2.598.480)。

工具书类

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文章信息

物品类型：研究文章

引用：Pagani C，da Rosa Cardoso FG，da Silv EG，Miranda CB，de Mello Rode S等。（2019）牙本质空洞清洁不同方法有效性的扫描电镜形态学评估。国际口腔健康杂志5（5）：dx.doi.org/10.16966/2378-7090.301

版权：©2019 Pagani C等人。这是一篇根据知识共享署名许可证条款发行的开放获取文章，允许在任何媒体中不受限制地使用、发行和复制，前提是原始作者和来源均已获得授权。

出版的历史:

收到日期：2019年7月30日

接受日期：2019年8月22日

出版日期：2019年8月28日