摘要

背景:糖化血红蛋白(HbA1c)是糖尿病的一种标志物，用于诊断、监测患者的糖尿病治疗依从性和总体管理。在临床实验室进行常规测量，HbA1c反映了患者之前三到四个月的平均糖尿病状态。由于临床实验室规程要求将纺织物标本与HbA1c水平相排斥，本研究调查了离心前后对全血标本HbA1c测量值的影响。

方法:对正常、糖尿病前期和糖尿病患者的全血标本按照实验室标准操作程序在三种不同的实验室仪器上进行HbA1c水平的提取、处理和分析。随后对标本进行离心，然后通过前后轻轻摇摆重新悬浮，并在相同的仪器上重新分析。用统计学方法比较离心前后HbA1c值的差异。

结果：离心前后全血HbA1c值在各组(正常、糖尿病前期或糖尿病)中统计相似。然而，仪器分析仪测量的糖化血红蛋白值有显著差异(p值<0.05)。

结论:与目前的实验室方案相反，标本离心不会影响HbA1c水平。葡萄糖与血红蛋白的结合是强的、稳定的、不可逆的。需要修订要求拒绝纺织物全血标本和随后重新绘制新鲜标本以确定HbA1c水平的实验室协议。再悬浮离心全血样品可以处理HbA1c水平而不影响患者结果。

缩写

HBA1C - 血红蛋白A1C（糖基化血红蛋白）;ADA - 美国糖尿病协会;OGTT - 口服葡萄糖耐量试验;BNP - βNatriuretic Peptide

关键词

全血;糖尿病;糖化血红蛋白;离心分离;分析程序

介绍

糖尿病的诊断通常通过测量病人的血糖来完成。四项标准中有三项直接测量患者的血糖，而糖化血红蛋白的测量则是间接的。它是对血红蛋白A与葡萄糖结合或与β链的一个或两个n端缬氨酸糖化的定量体外测量。每美国糖尿病协会(ADA)[1],糖尿病诊断时(i)患者的空腹血糖水平或超过126 mg / dl, (ii)症状存在于一个病人血糖大于200 mg / dl, (iii) 2 h后口服葡萄糖耐量试验(OGTT)或超过200 mg / dl和/或(iv)糖化血红蛋白大于6.4%。高血糖反映了胰岛素分泌的绝对或相对缺乏或对胰岛素作用的代谢反应不良。糖化血红蛋白水平反映了一个人在过去三到四个月的糖尿病状况。血液循环中红细胞暴露在高葡萄糖水平下的时间越长，血糖越高。与常规和重复的每日血糖水平监测不同，糖化血红蛋白的测量对患者方便，且相对不受急性(如进食、禁食、压力或疾病相关)血糖水平[2]扰乱的影响。

因为血糖水平和糖化血红蛋白之间存在着很强的联系，所以测量人类全血的糖化血红蛋白水平也可以间接地用来诊断糖尿病。根据ADA标准，HbA1c水平高于6.4%即为糖尿病诊断。总的来说，OGTT对糖尿病的诊断比HbA1c更敏感。糖化血红蛋白在识别糖尿病风险个体以及帮助糖尿病患者长期监测和管理血糖水平方面更具有特异性[1-3]。

糖尿病是美国工龄人群失明的主要原因[4]，是美国终末期肾病和西方世界周围神经病变的最常见原因[4,5]。HbA1c升高反映血糖水平控制不良，增加患者发生微血管并发症的风险[5]。HbA1c水平升高与糖尿病并发症(如视网膜病变、肾病、神经病变和微尿症)之间存在密切关系[6-10]。通过更好地控制和管理患者的血糖水平，可显著降低与糖尿病并发症相关的成本[6,9]。为此，医疗专业人员经常使用HbA1c值来指导治疗决策，评估护理质量，预测微血管并发症的发展和进展风险[5,10]。

在确定HBA1C水平时，目前的临床实验室方案规定在测量之前不应离心全血样品。如果在重新悬架以进行HBA1C测量之前意外旋转，则该标本是经常拒绝的并且请求回忆回忆。veripuncture在薰衣草顶管中收集的整个血液，用于HBA1C定量也可用于其他测试;如完全血统计数（CBC），红细胞沉降率（ESR）和/或βNatrieturetic肽（BNP）测量。通常，建议在BNP测量之前进行CBC，ESR和/ ORHBA1C分析。

BNP由等离子体测量;因此，BNP测量的方案要求在测试之前将样本进行离心。一旦离心为BNP分析，将丢弃样本，不能再用于HBA1C测量。然而，标本拒绝的理性是脆弱的，而不是基于科学知识。为什么离心包装的细胞不能重新悬挂和混合所需的HBA1C水平。因此，本研究的目的是确定全血样品离心对HBA1C测量的影响。我们假设全血样的离心和重悬浮不应改变测量的HBA1C水平，因为如先前所报道的血红蛋白β链上的N-末端缬氨酸的糖基化是稳定的，不可逆的[3]。

材料和方法

全血标本静脉穿刺入抗凝薰衣草顶管，室温下8小时内处理或2-8℃下保存7天。机构审查委员会(IRB)的批准提交给温斯顿-塞勒姆州立大学IRB合规官在资助项目办公室。本研究的所有标本均为临床实验室标本，或来自学生志愿者，他们在我们的临床检验科学项目中练习采血技巧。使用清洁的涂抹棒检查标本，去除任何可见的纤维蛋白凝块和颗粒物质。所有标本被来回摇摆彻底混合在低速或轻轻倒几次之前同质性分析三个不同的乐器分析仪(8100年建筑师,Siemen DCA和拜耳糖化血红蛋白+)目前使用在临床实验室或point-ofcare设置每各自的制造商的包插入。每次仪器分析之前都进行适当的校准和/或质量控制。分析后，标本在6000 rpm下离心5分钟，按照之前在分析仪上重复测量hb1clevel的描述，通过混合重新悬浮。

统计分析

将测量的前和将离心的HBA1C值分为三种非糖尿病，糖尿病患者，每种美国糖尿病协会（ADA）分类[1]。第1组：（HBA1C <5.7％ - 非糖尿病），第2组（5.7-6.4，州损失损失）和第3组（> 6.4 - 糖尿病）。使用IBM的社会科学包（SPSS）软件来分析来自每组的所有定量预先和HBA1C数据，用于确定均值和标准错误。独立的T检验用于测试测量的预热和从各组的离心HBA1C值和仪器分析仪之间的差异。P值<0.05被认为是统计学意义的。

结果

结果表明，不管测量中使用的分析仪是什么，标本离心前后的糖化血红蛋白值是相似的。糖化血红蛋白是诊断和监测糖尿病治疗的一项重要的常规检测。为了了解标本离心对测定的糖化血红蛋白水平的影响，按照以下方法采集全血并进行处理。从四个初始样品中测量的HbA1c值在离心前后被发现是相似的。这一观察结果首次表明，如先前报道的，葡萄糖仍然永久地结合在血红蛋白[3]的β链的n端缬氨酸上，且不受标本离心的影响。

为了进一步证明该发现的有效性，我们在建筑师8100系统上分析了来自三个ADA组[非糖尿病（20样品），糖尿病（16个样品）和糖尿病（16个样品）和糖尿病（11个样品）的更多标本，用于平均值和标准错误。如图1所示，每个组的预先和后期标本CentrifugationHBA1C结果是统计学上的。为了证实建筑师8100的结果，我们在另外两种临床实验室分析仪（现在+）使用的另外两种临床实验室分析仪（现在+）上重复了更多样本[非糖尿病（12标本），前糖尿病（12样品），前糖尿病（6样品）和糖尿病（5标本）]的分析用于测量HBA1c。结果在图2中，再次显示前后离心HBA1CValues中没有统计学差异。我们得出结论，因此血红蛋白的糖基化是稳定的并且不受离心的影响。这些发现同样是真实的，以更高的离心速度。预期仪器之间测量的HBA1C值的观察到的变化是预期的，因为如前所述，血红蛋白变体干扰仪表敏感性[3,11]。

由于本研究源于共享(HbA1c和BNP)标本的排斥反应，在检测HbA1c之前，我们意外地旋转了BNP水平，因此决定检测血浆体积对测量的HbA1c水平的影响。首先对全血标本(两份)进行处理和分析，分析HbA1c值，纺丝并取出500µl血浆(假设该量是用于BNP测量的体积)。如所述，填充的红细胞通过混合重新悬浮，并在仪器上再次分析。血浆体积的减少并不影响全血离心前后糖化血红蛋白的测量(数据未显示)。这一观察结果表明，仪器分析仪只测量糖基化红细胞的分数。因此，HbA1c水平与红细胞悬浮的血浆容量无关。

图1：对Architect 8100仪器分析的各组标本离心前后HbA1c值(平均值±SEM)进行比较，各组内离心前后HbA1c测量值无统计学差异。非糖尿病(4.93±0.011)、前驱糖尿病(5.97±0.023)、糖尿病(9.80±0.063)

图2：来自两种不同仪器的平均HBA1C测量（西门子DCA＆Bayer的A1C Now +）显示，在组前/后离心HBA1C值比较中没有统计差异（p值小于0.05）。Siemen DCA的平均值和标准误差是：非奶肉（5.25±0.029），预奶油（6.36±0.042）和糖尿病（12.58±0.070）;拜耳A1CNow +包括：非奶肉（5.10±0.122），预奶油（6.21±0.071）和糖尿病（10.60±0.106）。
然而，观察到仪器测量之间的显着变化，P值小于0.05 [非糖尿病前/柱0.003 / 0.003 / 0.003 / 0.038 / 0.03 / 0.038 / 0.019]。

讨论

我们提供的证据表明，全血标本离心对测定的HbA1c值没有统计学影响。离心前后测定值稳定。我们的发现与之前的研究一致，即血红蛋白n端缬氨酸的糖基化是稳定和不可逆的[2]。一旦与血红蛋白结合，在红细胞的整个生命周期(~4个月)中，葡萄糖都与血红蛋白结合。离心后的标本排斥为时过早，而且代价昂贵。因此，需要修改排斥反应和重绘纺丝标本的临床实验室程序。这样的修改不会损害病人的结果和护理质量。事实上，修订应能改善周转时间、病人护理和降低整体医疗成本。与那些没有糖尿病的人相比，40岁诊断为糖尿病的人在其剩余的一生中在糖尿病上的医疗支出约为12.4万美元。消除不必要的标本排斥反应可以降低成本，特别是对糖尿病患者和少数群体而言。

HBA1C对患者护理的好处已经有充分的记录。HBA1C（i）有助于诊断糖尿病的诊断，（ii）有助于鉴定可能有患糖尿病的风险的患者，（iii）用于监测糖尿病糖尿病患者的长期血糖对照。此外，准确的测量允许医生帮助患者有效地治疗长期微血管并发症，糖尿病如失明，末期肾病和神经损伤[7-10]。这种努力应大大降低与这些慢性病管理有关的长期成本。

糖化血红蛋白水平的变化与几个影响红细胞周转率的因素有关，如患者年龄、种族、种族、血红蛋白疾病和共存的医疗条件[1,11,13]。正如我们的研究表明，离心不会影响HbA1c糖基化水平。血红蛋白病和各种血红蛋白变异对分析仪造成严重干扰，从而影响HbA1c测量值[3]。在非洲和东南亚等血红蛋白变异较多的地区，果糖胺是糖尿病[11]的替代标记物，而不是糖化血红蛋白，因为血糖控制需要在较短的时间内进行。果糖胺反映葡萄糖与血浆蛋白的结合，主要是白蛋白，其半衰期约为2 - 3周[11]。

最后，由于目前的实验室做法拒绝纺丝标本用于糖化血红蛋白的测量，我们提供了相反的新证据。在不影响患者护理的情况下，我们的发现表明，纺纱样品可以重新悬浮、分析并报告结果。先前发表的结果支持，葡萄糖-血红蛋白相互作用是稳定和不可逆的[2]。因此，要求拒绝/重绘离心后标本的实验室协议需要修改。修订后应能改善病人护理的周转时间;如果消除了不必要的标本拒绝，可减少与重划相关的成本和总体医疗支出。卫生保健总支出减少的程度需要进一步研究。除了成本，患者暴露的风险与多次采血，如注射疼痛，感染和可能的血肿消除。

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条信息

文章类型:研究文章

引用:Peterson S, Smith H, Cochrane S, Reid Q, Kenbata D，等(2018)全血离心对血红蛋白A1c测定的影响。临床检验医学杂志3(1):d .doi。org/10.16966/2572 - 9578.118

版权:©2018 Peterson S等人。这是在创意公约归因许可的条款下分发的开放式文章，其允许在任何介质中不受限制地使用，分发和再现，只要原始作者和来源都被记入。

出版历史：

收到的日期：2018年3月15日

接受日期:2018年3月30

发表日期:2018年4月5日