摘要

非霍奇金淋巴瘤(NHL)合并丙肝病毒(HCV)和Sjögren综合征(SS)有共同特征。TNFAIP3/A20的遗传缺陷有助于SS的淋巴瘤发生。我们研究了87例伴有NHL和171例无NHL HCV患者的TNFAIP3遗传变异。rs2230926G变异的患病率在有NHL和没有NHL的患者之间没有差异(p=0.51)。然而，在NHL患者中，rs2230926G等位基因仅限于类风湿因子阳性(RF+)患者(14.6% vs 0%， p=0.015)。HCV感染是慢性抗原刺激的一个新例子，其中TNFAIP3编码变体有利于自身免疫B细胞的淋巴瘤逃逸。

关键词

A20;HCV-associated淋巴瘤;NF-kB

介绍

丙型肝炎病毒(HCV)感染与一系列肝外表现相关。非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发展是最严重的并发症之一，其奇比(OR)在2到4之间[1,2]。这些淋巴瘤常表现为脾脏或淋巴结外的局限性。HCV感染更具体地与边缘区淋巴瘤(MZL)和弥漫大b细胞淋巴瘤(DLBCL)有关，这通常是由转化的MZL[3]引起的。II型混合cryoglobulinémie (MC)的存在，即具有类风湿因子(RF)活性的单克隆免疫球蛋白(Ig) IgM的存在，是HCV患者中NHL发展的主要危险因素。

HCV感染是慢性感染的原型，由于长期无症状的疾病，高水平的病毒抗原(Ag)和高抗HCV体液反应，具有高水平的血液循环免疫复合物。当IgG以免疫复合物[5]的形式存在时，它们就具有免疫原性。这些免疫复合物刺激带有RF活性的IgG膜的B细胞，即分泌针对IgG Fc部分的抗体。有趣的是，De Re等人发现很大一部分hcv相关的NHL可变基因区域具有与规范RF序列[6]同源的序列。值得注意的是，在hcv相关的NHL中发现的限制性BCR基因片段与原发性Sjögren综合征(pSS)相关的NHL[7]表达的非常相似。并发pSS和慢性HCV感染的淋巴瘤具有其他显著特征，包括MZL的优势、粘膜定位的高频率、与MC的相关性以及慢性抗原刺激激活[8]的靶器官的淋巴瘤定位。

我们的研究小组最近证明了遗传变异TNFAIP3 / A20，参与控制NF-kB激活，促进pSS患者[9]中MALT淋巴瘤的发生。这突出表明，在慢性抗原刺激的背景下，自身免疫B细胞激活检查点的功能障碍可能沉淀自身免疫B细胞进入恶性转化。鉴于pSS和HCV患者的淋巴瘤发生的相似性，我们旨在评估A20基因变异在HCV相关淋巴瘤中的作用。

方法

研究设计和参与者

从2个队列中选择HCV和淋巴瘤患者。首先，从淋巴c研究中选择69例患者，这是一项观察性多中心研究，包括B-NHL和活动性HCV感染的成年患者，排除那些合并HIV[10]感染的患者。收集细胞学和组织学样本进行集中检查和分子分析。在HCV和[11]冷球蛋白相关性血管炎的GWAS中，加入了18例基因分型患者，进一步补充了这一人群。

从3个队列中选择HCV感染且无淋巴瘤的对照组患者:46例患者来自巴黎la Pitié-Salpêtrière医院内科，28例来自维勒瑞夫Paul Brousse医院肝病科，97例来自上述GWAS的患者在HCV和冷球蛋白相关性血管炎[11]中进行了治疗。

所有病例和对照组均为白种人。所有患者均表示知情同意。已获得Paris Necker伦理委员会的批准（n°05-06-08），该研究已在clinicalTrials.gov（识别号NCT01545544）上注册。

血液样本和血清学分析

免疫学分析包括血清Ig水平和RF。各中心进行冷球蛋白测定。MC阳性定义为冷球蛋白水平大于0.05 g/L。进行细胞学和表型检查，以排除循环淋巴瘤细胞超过5%的患者，重点研究种系DNA。

基因分型和全外显子测序

从种系DNA中对TNFAIP3基因区段外显子3内的rs2230926单核苷酸多态性进行了基因分型。基因分型采用应用生物系统公司(Foster City, CA, USA;试验没有。26882391-1)，使用竞争性等位基因特异性PCR系统(LGC Genomics)，如前所述[9]。TNFAIP3基因的9个外显子在种系DNA上测序，采用Sanger法，如前所述[9]。上述HCVassociated冷球蛋白纳入GWAS的患者已经对rs2230926如前所述[11]进行了基因分型。

统计分析

连续数据用中位数[范围]描述，分类变量用数字(%)描述。病例相关性(例如，HCV患者与vs．无淋巴瘤)，淋巴瘤组织学类型和免疫状态的比较采用Fischer精确试验。p值<0.05被认为是显著的。

结果与讨论

本研究分析了87例HCV和NHL患者及可用DNA。组织学亚群为29例DLBCL，37例MZL，包括8例脾脏MZL（SMZL），5例套细胞淋巴瘤，8例滤泡性淋巴瘤，2例慢性淋巴白血病和1例慢性EBV相关淋巴增生。48/87（55.2%）和43/66（65.1）中存在RF和MC这些患者与171例无NHL的HCV患者进行比较（表1）。在对照组中，127/171（74.3%）和118/143（82.5%）存在RF和MC对照组中RF和MC的高频率是由于对对照组的选择。作为第一个探索性方法，29例HCV感染和淋巴瘤患者接受了生殖系DNA的TNFAIP3全外显子测序。错义外显子rs2230926G风险变异体导致外周血中的氨基酸被Cys取代在4例（13.8%）患者中出现了第3种。没有其他患者在编码外显子中出现TNFAIP3变体。因此，我们决定只关注其他58例淋巴瘤患者和171例对照组的rs2230926变体。总的来说，在7/87（8%）中发现的与HCV相关的NHL和rs2230926G变体之间没有关联非霍奇金淋巴瘤患者和19/171（11.1%）非霍奇金淋巴瘤患者（p=0.51）（图1，上图）。将非霍奇金淋巴瘤患者与另一大组无冷球蛋白血症的丙型肝炎患者进行比较时，观察到相同的结果（Laurent Abel；数据未显示）.与pSS患者相反，我们未发现该变异与组织学亚型之间存在任何关联；值得注意的是，MZL与其他亚型之间的频率无显著差异（分别为3/37和4/50，p=1）然而，我们发现，在非霍奇金淋巴瘤患者中，rs2230926G等位基因的存在仅限于RF+患者（7/48（14.6%），而RF-患者（0/39（0%），p=0.015）（图1，右下面板）。有趣的是，在有HCV感染但无非霍奇金淋巴瘤的对照组中，rs2230926G和RF之间没有关联（13/127中rs2230926G）（10.2%）RF+患者与6/44（13.6%）RF-患者相比，p=0.58）（图1，左下面板），表明风险变量与RF活动的出现无关。

	非淋巴瘤患者 n = 171	淋巴瘤患者n=87
人口统计学特征男性n (%)	72 (42.1)	39 (44.8)
免疫学
年龄，年龄，中位数[(范围)]	57 (25 - 92)	61 [24 - 87]
类风湿因子n阳性(%)	127 (74.3)	48 (55.2)
淋巴瘤组织学n (%)
DLBCL	NA	29 (33.3)
MZL	NA	8 (9.2)
SMZL	NA	8 (9.2)
佛罗里达州	NA	8 (9.2)
毫升	NA	5 (5.7)
CLL	NA	2 (2.3)
PTLD	NA	1 (1.1)
NS	NA	5 (5.7)

表1:HCV患者的特征。DLBCL：弥漫性大B细胞淋巴瘤，HCV：丙型肝炎病毒；MZL：边缘区淋巴瘤，SMZL：脾脏边缘区淋巴瘤，FL：滤泡性淋巴瘤，ML：外套膜淋巴瘤，CLL：慢性淋巴细胞白血病，PTLD：移植后淋巴增生性疾病，NS：未指定

图1:HCV患者中rs2230926G等位基因的频率根据NHL状态(上图)、NHL患者中的RF状态(下图，右图)或NHL-患者中的RF状态(下图，左图)。HCV:丙型肝炎病毒;NHL:非霍奇金淋巴瘤;RF-:类风湿性因子阴性患者

总之，我们发现了TNFAIP3的错义外显子rs2230926 SNP与hcv相关淋巴瘤患者中RF的存在之间的关联。风险等位基因已被证明与轻微降低对NF-kB通路激活的控制能力有关[9,12]。与我们在pSS中的观察相反，这种NF-kB激活控制的降低似乎不会在HCV感染的情况下诱发淋巴瘤，因为在NHL的发生和A20的外显子变异之间没有发现关联。相反，我们的研究结果强调了从免疫复合物(IC)(抗HCVIgG/HCV-Ag)慢性刺激RF+ B细胞到NHL的多个步骤中A20损伤的可能参与。由于大量的igg -免疫复合物[5]的慢性刺激，表达rf的克隆比非rf克隆更容易转化为恶性淋巴瘤。有趣的是，最近的研究表明，RF克隆在发炎的pSS唾液腺中很少见，但更容易转化为恶性淋巴瘤[13]。为了避免持续刺激RF+ B细胞的淋巴瘤逃逸，完全控制NF-kB通路的激活可能是必要的，而这种控制的轻微功能障碍可能足以驱动淋巴瘤的发生。这可能解释了为什么A20的种系变异可能在RF+ B细胞中有特定的后果。

种系多态性在RF+和RF-患者中产生不同结果的原因仍有待确定。一种假设是，在这两种情况下导致淋巴细胞增殖的致病过程是不同的，微环境的压力可能也不相同。RF阳性HCV相关NHL，更常见的是MZL，依赖于含有HCV抗原的免疫复合物的慢性刺激。这些受刺激的B细胞的NF-kB激活增加可能有利于淋巴瘤逃逸。相反，RF阴性HCV相关NHL(更常见的是DLBCL)可由其他机制诱导，包括HCV直接感染B细胞，从而促进淋巴瘤转化。在后一种情况下，我们可以推测，SNP可以通过增加浸润淋巴细胞和/或巨噬细胞中NF-kB的激活，促进更有效的抗肿瘤和/或抗病毒反应，从而保护淋巴瘤的发展。有趣的是，最近的研究表明，在T CD8浸润性黑色素瘤中，通过rs2230926G观察到A20的损伤，可以改善肿瘤生长[14]的控制。

总之，这项研究将我们之前对pss相关性MALT淋巴瘤的观察扩展到另一个在慢性抗原刺激下发生的淋巴瘤的例子。在这两种情况下的特点是慢性刺激RF+ B细胞，编码遗传变异TNFAIP3导致A20功能的小功能缺陷似乎有利于这些自身免疫B细胞的淋巴瘤逃逸，但对非自身免疫B细胞的淋巴瘤形成没有积极作用。通过有效治疗丙肝病毒感染来抑制慢性抗原刺激似乎是这些丙肝相关淋巴瘤的合理治疗方法。

的利益冲突

作者没有利益冲突声明

确认

我们感谢Laurent Abel(法国巴黎巴斯德研究所)，他让我们获得了一大批HCV患者的基因分型数据。

资金和赠款 讨论

ANRS HC13淋巴c研究由主办方ANRS(国家病毒研究机构)资助。获得NIH (R01DA013324 to D.T.)资助。

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条信息

文章类型:研究文章

引用:Nocturne G, Boudaoud S, Besson C, Davi F, Canioni D, et al. (2016) TNFAIP3错义变体与丙肝相关淋巴瘤患者存在类风湿因子相关。J Blood Disord Med 1(3): doi http://dx.doi.org/10.16966/2471-5026.111

版权:©2016 Nocturne G等。这是一篇开放获取的文章，在知识共享署名许可协议的条款下发布，该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制，前提是注明原作者和来源。

出版的历史:

收到日期：2016年10月08

接受日期:2016年10月24日

发表日期:2016年10月28日