图1:感染流感病毒А/PR/8/34的小白鼠6天内肺和血清中蛋白酶活性的变化动态(提供了6-9 g和16-17 g小鼠的总经验数据)
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Divocha弗吉尼亚州1 *Basarab丫2
1乌克兰交通医学科学研究所，敖德萨，乌克兰2乌克兰医科牙科学院，乌克兰波尔塔瓦
*通讯作者:Divocha VA，乌克兰交通医学科学研究所，敖德萨，乌克兰，E-mail: divocha09@ukr.net
本研究检测了当非亲缘白小鼠感染流感病毒时，对动物肺组织和血清中蛋白酶活性变化的影响。这些材料同时研究这种蛋白酶抑制剂的活性。
流感病毒;Trypsin-like蛋白酶;的蛋白酶抑制剂
病毒与细胞的相互作用是一个单一的整体，代表着两种相反原则的一套内在关系。这种相互作用的最终结果在遗传学上由病毒的拥有者和始发者共同决定，并取决于病毒繁殖过程的调节和生物体的保护力。这些过程之间的平衡决定了相互作用的结果:所有者的毁灭，其绝对恢复或形成感染污染的慢性形式[1-6]。
众所周知，在流感病毒的复制过程中，血凝素的前体是合成的，它在大亚基和小亚基上分裂是病毒获得感染活性所必需的。分裂是由细胞胰蛋白酶样蛋白酶进行的[7-11]。在流感感染期间，有一个特定的细胞蛋白酶的变化，证明病毒蛋白与细胞成分的合作相互作用。最有可能的是，蛋白酶水平变化的动态与病毒的复制和由相同蛋白酶水解的激活有关。然而，对这一现象的研究却太少;目前只有[12]报道流感病毒和仙台[12]病毒感染鸡胚后蛋白酶活性在早期下调，在感染后期升高。
本工作的目的是研究实验性流感感染对感染流感病毒A的小鼠和鸡胚的蛋白酶动态和抑制活性的作用。
在研究中，使用了适合于小白鼠肺组织的流感病毒А/РR/8/34 (Н1N1)(该病毒来自俄罗斯医学科学院dii.ivanovskiy病毒学研究所博物馆毒株实验室)。病毒感染滴度为7 lg EID50/0.2 ml。选用7-9、16-17g的白色远系小鼠。经А/РR/8/34鼻内途径感染，体积0.05 ml，易乙醚麻醉稀释10－2相当于20个LD50传染性病毒剂量。这种剂量可在染病后6天内100%杀灭动物。每组5只小鼠处死，感染后15、30 min、1.6 h及1-6 d进一步取肺、取血。肺部是刷新两次在寒冷的磷酸盐缓冲剂рН7.5和在研钵磨碎,悬浮在缓冲(1毫升/ 1肺),单一化的超声波模式7格兰设备高强度超声波队伍,芝加哥,«科尔Parmel»(美国),在10000 rpm离心机离心干燥机RC5c,生产的«Sorvall仪器»,转子SS-34,1小时，在+4°С。用上清液和血清来确定活性:感染性、蛋白酶和抑制蛋白酶。用S.V.Vovchuk[14]修饰的K.M.Veremeenko法测定胰酶样蛋白酶[13]的活性。肺匀浆和血清中蛋白酶抑制剂活性的鉴定采用A.P.Levitsky[15]所述的病例法。通过感染9 ~ 10天的鸡胚测定病毒在感染小鼠肺部的感染滴度，并在lg EID中表达50/0.2 ml。按标准方法进行血凝反应。
接收到的数据使用微软进行处理®Excel软件。
在未感染动物的肺和血清中，胰蛋白酶样蛋白酶及其抑制剂的水平在观察期间(6天)没有发生评估变化，处于平衡状态(图1)。
短句来源在А/PR/8/34 (Н1N1)株流感病毒鼻腔感染小鼠时，从感染后15分钟至6小时，肺和血清蛋白酶活性下降，一种抑制剂活性升高。特别是在肺部(图1)。感染后最初6小时的血凝和感染活性未被测定。
在随后的一段时间内，蛋白酶活性增加了3理查德·道金斯日达到参考水平。在此期间，血凝和感染活性急剧增加。感染后48 h，感染活性和血凝活性达到最大值(图2)。感染后96 h，感染活性和血凝活性急剧下降，被感染动物开始死亡。被感染的动物仍然活着的4th侵染后第一天，蛋白酶活性重复增加5-6th天变得明显，因此感染和血凝活性都反复增加。由6th当天，对照组流感病毒动物死亡。
图2:鸡胚尿囊液中流感病毒А/PR/8/34感染的小鼠肺匀浆的感染和血凝活性
因此，感染病毒的积累与蛋白酶活性的抑制具有相关性nd天侵扰。同时，病毒滴度由5th在受感染动物的肺组织和血清中，蛋白酶活性也在上升。
在寻找蛋白酶活性降低的原因上1圣在感染后的第一天，我们检测了肺组织和血清中蛋白酶活性的抑制。
由图3可以看出，未受感染的动物血清中蛋白酶活性和蛋白酶抑制活性均处于稳定水平。在肺组织中，发现蛋白酶抑制活性非常少。
图3:流感病毒感染小鼠肺中胰蛋白酶样蛋白酶抑制剂的活性А/PR/8/34
在被侵染动物的肺组织和血清中，蛋白酶抑制活性在感染6 h后急剧上升，在感染2 h后下降nd天，然后逐渐上升5th的一天。
因此，我们有可能通过蛋白酶抑制活性的增强来解释感染后最初几个小时内蛋白酶活性的降低(在感染小鼠的肺组织中可以清楚地观察到)，并且蛋白酶活性升高了2-3理查德·道金斯通过抑制活性的抑制，感染污染的发展天数。然而，同时增加的蛋白酶和抑制活性的5th感染后的第一天，有其他原因的蛋白酶激活在这一时期的感染发展。
引用的数据表明，在未受感染动物的血清中，蛋白酶活性和蛋白酶抑制活性的平衡在感染时被打破。在感染过程中有可能确定三个阶段，这三个阶段的特征是病毒繁殖程度、蛋白酶活性水平和蛋白酶抑制活性水平的不同。
最关键的变化发生在感染后的最初几个小时。感染6 h后，被侵染动物肺和血清中蛋白酶含量均下降，蛋白酶抑制活性升高。因此，可以认为蛋白水解活性的降低与蛋白酶抑制剂各自的积累有关。显然，流感病毒感染的细胞诱导肺组织和血清中出现抑制剂。
在感染病毒积累最多的时期(侵染后2天)，蛋白水解活性下降，但这种下降伴随着抑制剂活性的下降。可能的原因之一是利用细胞胰蛋白酶在受感染小鼠的肺部和受感染动物的机体深处进行蛋白水解病毒的激活。蛋白酶活性在5 ~ 6天内的反复下降是由其他因素引起的，明显是由菌群覆盖引起的。
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文章类型:研究文章
引用:Divocha VA(2016)实验性流感感染污染小鼠机体损伤第一阶段抑制剂和蛋白酶的动力学。自体免疫感染疾病2(3):doi http://dx.doi.org/10.16966/2470-1025.118
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