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研究文章
小母牛和婆罗门成年女性Antimüllerian激素水平测定及其与卵泡数和卵巢大小的关系

Macias-Andrade霁1、2 *Hurtado EA1Carreno-Mendoza艾尔1Vivanco-Mackie HW2

1 厄瓜多尔农业技术学院Manabí， Manabí
 2 国立农业大学，利马，Perú

*通讯作者:Macías-Andrade JI，厄瓜多尔理工农业学院Manabí， Manabí，电子邮件:jorgeignaciomacias@hotmail.com


总结

这项研究是在厄瓜多尔中部沿海地区Manabí省Paján市开展的。目的是确定Antimüllerian激素(AMH)水平与婆罗门女性卵泡数、个体年龄和卵巢大小之间的功能关系。本研究从具有较高遗传价值的婆罗门牛群体中随机选取60头(60头)雌性牛，年龄在18 ~ 132月龄之间。此外，对所有女性进行了排卵同步试验。采集血样，采用ELISA检测血清AMH水平，使用MOFA®试剂盒进行样品分析。通过直肠内超声评估卵巢卵泡数和大小。通过回归分析对数据及各变量之间的关系进行检验。血浆AMH水平随年龄增长而下降;AMH水平与年龄之间以及小卵泡、总卵泡与年龄之间呈反向线性调整，显示随着时间的推移卵巢储备衰竭的迹象。我们观察到卵巢大小和卵泡数之间有直接的线性关系。

关键字

Antimullerian激素;毛囊;卵巢大小;Brahaman牛;年龄的影响


介绍

繁殖效率是决定牛群生产经济效益的决定性因素。雌性牛的生殖生命从胎儿发育开始就确立了，在此期间，牛生殖系统的制备开始于[1]。在出生的时候,卵巢已经潜在的生产中包含固定数量的原始卵泡卵母细胞,被称为卵巢储备和构成的结构引发生殖发情周期的过程和阶段(爱尔兰JJ, et al。[2],Findlay JK, et al .[3])。在成年哺乳动物的生殖过程中，卵泡和卵母细胞的数量变化很大。这是因为，正如文献记载的那样，哺乳动物出生时，在形态上健康的卵泡和卵母细胞的数量变化很大，随着年龄的增长，这些数量开始迅速减少，而且从未得到补充。Erickson BH, et al.[1]报道牛在1岁时失去了80%的原始健康卵母细胞。

窦卵泡计数与生殖参数有关，如卵巢大小、黄体直径、健康卵母细胞数量、子宫内膜厚度、孕酮浓度、妊娠率和其他生殖指数(Singh J, et al. [4]， Cushman RA, et al. [5];Modina SC等;Jimenez-Krassel F等。马丁内斯MF等[8])。基于这个窦的卵泡数与其他生殖参数相关关系与生育能力已经提出Silva-Santos KC, et al。[9],和Morotti F, et al。[10],执行的卵子的奶牛可以选择使用一个超声检查卵泡数量的生殖生命的开始。同样，Antimüllerian激素(AMH)已被认为是卵巢对超排卵反应的指标(Souza AH, et al.[11])，它与窦卵泡计数和卵母细胞活力高度相关(Baruselli PS, et al.[12])。

Monniaux D等人[13]提出，AMH的表达局限于发育中的卵泡颗粒细胞，可以作为卵巢窦卵泡巢大小的内分泌标志。Gobikrushanth M, et al.[14]指出，直到5岁，牛窦卵泡计数和循环中AMH浓度随着卵泡募集的增加而增加，然后随着卵巢储备的逐渐耗尽而下降。

预计年龄对小母牛的窦卵泡计数有负面影响，而对小母牛生殖道的评估是一种有效的方法，可以作为任何牛群生育状况的指标(Cushman RA, et al.[5])。另一方面，Zangirolamo AF, et al.[15]指出，窦卵泡计数是选择胚胎数量潜力大得多的动物的辅助工具。

一些研究试图确定有助于预测牛繁殖行为的形态学或表型特征。窦卵泡总数反映了卵巢卵泡的储量，这与奶牛的生育能力有非常密切的关系(Danielle M, et al. [16]， Martinez MF, et al.[8])。从这个意义上说，Morotti F, et al.[17]研究了母牛和肉牛的窦卵泡数与生育参数之间的相关性，发现它们在牛中重复的结果是矛盾的。Maculan R等人[18]发现了卵巢大小和公牛雌性窦卵泡数之间的关联。同样，在卵巢较大的荷斯坦奶牛(Ireland JLH, et al.[19])和安格斯小母牛(Eborn DR, et al.[20])中也获得了较高的卵泡数。主要的兴趣集中在在早期选择替代小母牛的决策上，这将使低生育能力的动物迅速离开牛群，并用于其他目的，从而提高生产系统的盈利能力。

尽管对卵泡动力学及其与生殖生物技术的生育和效率的关系进行了大量的研究，但在这一过程中所涉及的调节因素和机制尚未完全了解，也没有关于这些关系的信息Bos indicus．因此，本研究的目的是评估血浆AMH水平与婆罗门女性卵泡数、年龄和卵巢大小之间的功能关系。

材料和方法
位置

这项研究是开展Brahaman牛群的光环日耳曼尼亚公司,位于Pajan的直辖市,省张照片,厄瓜多尔,01°33 ' 0 60“年代,80°25 W和海拔110 mosl,年平均气温24°C和平均年降雨量为1500毫米。AMH分析是在厄瓜多尔Manabí农业技术学院生物技术实验室进行的。

牧群由1500头不同年龄、不同生理阶段的布拉哈曼牛组成，饲养在围场中，以饲养为主香附子nlemfuensis和黍最大并根据年龄、体重和生理阶段添加浓缩矿物质以满足营养需求。水来自自然资源。

研究课题和试验管理

本研究从一个高遗传价值的婆罗门牛群体中选择60头(60头)雌性牛，年龄在18 ~ 132月龄之间。为了使所有动物的发情周期开始时均达到排卵同步方案，在第0天插入黄体酮装置(DIB 0.5 Zoetis)和剂量为2 mg雌二醇苯甲酸酯(性腺二醇1 mg/mL;第8天取出装置，注射前列腺素(Ciclase, Zoetis) 0.15 mg，第9天注射苯甲酸酯雌二醇1 mg。用于测定AMH的所有血液样本都是在同步方案启动当天，即激素应用之前采集的。

变量和方法

使用BD Vacutainer®NH管(Becton Dickinson and Co.)在真空下与肝素钠通过颈静脉穿刺抽取4ml血液。然后将该血液在4°C下进行3,200克冷冻离心10分钟，随后立即在-20°C下保存，直到ELISA。

血清样品在ELISA前先在水浴中解冻;他们在“漩涡”中摇晃，并在4°C下3200克离心10分钟。然后，在4°C有第一抗体的情况下孵育12小时;在此之后，在室温下，在第二种抗体的存在下，再过1.5小时，最终看到读数。

血清AMH水平的测定采用ELISA检测、MOFA®“KITS”(AMH ELISA simple test Kit Bovine serum, 40个样品Max/Kit 21700/100)，并使用“Infinite 200 PRO Multimode Multiplate Reader”按照Monniaux D, et al.[21]所描述的方法进行读数;等。采用50 μL血清定量测定AMH浓度。

从卵泡波开始，在启动方案开始的第4、6和8天，用B型超声(迈瑞DP 50 VET®，中国深圳)和7.5 MHz线性传感器测量和接触卵泡，测定卵泡的数量和大小。在发热症状72小时后用相同的仪器测量黄体大小，卵巢大小以厘米为单位测量，在试验开始时也用直肠内超声测量。

所有幼龄雌性均有成熟的格罗夫滤泡，但并非所有幼龄雌性均有黄体。

数据分析

采用了几种统计方法来描述变量，包括集中趋势(平均值)和分散(平均值的标准偏差和标准误差)。另外，通过回归分析确定变量之间的函数关系程度。我们调整了牛龄与AMH水平、年龄和卵泡数量(小2-4mm、大>4 mm和总)之间的关系，同样地，卵巢大小与卵泡大小(小、大和总)之间的关系。使用InfoStat进行统计分析®软件

结果

变量的描述性分析如表1所示。可以观察到的平均抗苗勒氏管激素水平是297.25ρg / ml,而中位数是250.65ρg / ml,反映平均价值接近第三四分位数(310.4ρg / ml),在没有分布,结果与平均价值产生影响,一些值指向最高抗苗勒氏管激素水平。从AMH水平获得的高变异系数证明了这种情况(62.46%)。

变量 N 的意思是 中位数 第一四分位数 第三四分位数 标准偏差 变异系数
抗苗勒氏管激素(ρg / ml) 60 297.25 250.65 197.4 310.4 185.65 62.46
小卵泡 60 20.68 18.50 13 27 10.24 49.50
大卵泡 60 14.22 13．00 11 18 5.16 36.29
总毛囊 60 34.88 34.00 24 42 13.89 39.83
黄体(毫米) 41 13.66 13.80 12 15 3．30 24.14
右卵巢(厘米) 59 2.82 2.80 2．4 3．1 0.46 16.44
左卵巢(厘米) 59 2．79 2.72 2．25 3.37 0.64 23.10

表1:变量antimüllerian激素(ρg/ml)、卵泡数、黄体大小(mm)和卵巢大小(cm)的描述性总结。

对于小卵泡数、大卵泡数和总卵泡数变量，均值与中值相近，说明数据呈正态分布;平均值为20.68;小卵泡、大卵泡和总卵泡的变异系数分别为49.50、36.29和39.83。同样，黄体和卵巢的大小也显示出相似的平均值和中值，变异系数相对较低。

牛龄与卵泡数的关系

对于牛龄和卵泡数之间的关系，我们对变量小卵泡和总卵泡进行了显著的反向线性调整，其中很明显，随着牛龄的增加，小卵泡和总卵泡数量减少(图1)。在小卵泡数量的情况下，方程被调整为ŷ=-0.12x+27.3，确定系数为0.55;毛囊总数的调整公式为ŷ=-0.135x+43.44，确定系数为0.47。大卵泡数目的调节方程不显著。

图1:婆罗门女性年龄与小(A)、大(B)和总(C)卵泡数量的相关性。

牛龄与AMH水平之间的关系(图2)显示出一种反向因果关系，线性调整由方程式ŷ=-0.906X+292.2表示，决定系数为0.53;这些发现证实了18至24个月大的动物中AMH的血浆水平最高。AMH的水平巩固了图1所示的卵泡群，也显示了18 - 24个月之间较大的卵泡群，然后随着动物年龄的增长有下降的趋势。

图2:婆罗门女性年龄与血浆antimüllerian激素水平的关系。

卵巢大小和卵泡数

对于小毛囊数量的情况(图3)，将公式调整为ŷ=14.38x-22.45，确定系数为0.42。大卵泡数的校正公式为ŷ=6.35x-4.18，测定系数为0.20;滤泡总数的调整公式为ŷ=17.95x-19.32，确定系数为0.34。应该注意的是,尽管系数是显著的,调整方程相对较小,一般来说,他们解释结果通过卵巢大小的比例很低,这是补充通过血清抗苗勒氏管激素的关系描述和动物的年龄(见图1和图2)。

图3:婆罗门母牛和小母牛卵巢大小与小(A)、大(B)和总(C)卵泡数量的关系。

讨论和结论

我们的结果显示年龄和卵泡数量呈反比关系，这与爱尔兰JJ等人的报告相似，他们发现年轻人的窦卵泡数量有7倍的差异与但成年牛的卵泡波中窦性卵泡的数量在个体中有更大的一致性。这是一个非常有用的标记，以确定潜在的婆罗门胚胎供体女性。

随着年龄的增长，卵泡数量的减少是一种理性的生物学行为，因为卵泡数量反映了卵巢卵泡储备的状态，因此，可以预计，年龄越大的动物卵泡储备越少，因而卵泡也就越少。这种关系在荷斯坦牛(Burns DS, et al.[24])和杂交母牛(Cushman RA, et al.[5])中观察到。Koyama K，等人的[10]也报道了类似的结果，并指出从第一次分娩到第三次分娩的窦卵泡数量和从第4次分娩到减少的重复性。

Monniaux D，等人[21]指出，牛的卵巢储备在大约4至6岁之前相对保持不变，随后下降，同样，Cushman RA等人[5]显示肉牛的窦卵泡数从5岁开始下降。在我们的研究中，最年轻的动物卵泡数量最多，随着动物年龄的增加，卵泡数量逐渐减少。

Gobikrushanth M, et al.[14]指出，直到5岁，牛的窦卵泡数和循环中AMH浓度随着卵巢卵泡募集的增加而增加，然后随着卵巢储备的逐渐耗尽而下降。在图2中可以观察到，在我们的结果中，AMH水平在72个月后(3岁)下降。

相比之下，Hirayama H等人[25]发现年龄与AMH浓度或窦卵泡数量之间没有联系;然而，他们的结果表明，血浆AMH浓度是预测日本黑牛超级排卵反应的有用标记物，但由于卵巢反应和AMH水平随着时间的推移而下降，重复的超级排卵会降低预测的准确性。在婆罗门母牛的案例中，AMH水平相对于年龄的下降代表了在超级排卵过程中使用成年牛的限制。

Gobikrushanth M, et al.[26]在小母牛中观察到AMH浓度与窦卵泡数高度相关，而在母牛中则不显著。此外，Cardoso CJT, et al.[27]发现24 ~ 60月龄的Girolando奶牛(¾Holstein ×¼Gir)比12 ~ 14月龄的小母牛拥有更多的卵泡，我们的结果显示了相反的趋势。卡多佐作品中等离子体抗苗勒氏管激素浓度之间没有差别年龄获得高的毛囊数量之间的相关性和血浆抗苗勒氏管激素的浓度,这与毛囊的数量的减少和抗苗勒氏管激素水平根据Bramhan的年龄女性[28]。

Batista EO等[29]报道Bos indicus血液循环中AMH高于小母牛牛(930 vs 300 ρg/ml)，我们对婆罗门牛的结果显示，全组平均水平为297.25 ρg/ml, 12月龄小母牛的最高水平约为320 ρg/ml，与报道的水平更接近牛Batista EO等研究的小母牛[29]。

在我们的数据中，回归分析显示卵巢大小和卵泡数之间存在直接而显著的关联，这与牛的各种研究一致，这些研究报告了卵巢大与窦卵泡数高相关(Cushman RA, et al. [5];爱尔兰JJ等。[2];Modina SC et al.[6])。

年龄相近且卵巢较小的奶牛卵泡数较低。这影响了她们的生殖参数，如受孕率和生育间隔，因为正如文献报道的那样，它们也有关联。这些因素意味着牧群中更大的经济损失。鉴于这些情况，AMH水平的测定可以作为未来选择女性供胚者的卵巢储备的指标。

综上所述，我们的结论是:年龄与卵泡数量呈负相关关系，因为研究结果显示小卵泡和总卵泡数量随牛龄呈负线性调节，18 - 24月龄的数值较高。

同样，antimüllerian的激素水平也会随着年龄的增长而下降，在18 ~ 24个月的时候，激素水平最高。因此，在高龄时，可以考虑以AMH水平来丢弃供牛[30]。

卵巢大小与小卵泡、大卵泡和总卵泡的平均数量呈线性关系。

确认

向Manabí农业技术学院致敬，感谢它的宝贵贡献使这项研究成为可能。

的利益冲突

作者声明没有利益冲突。


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文章类型:研究文章

引用:Macías-Andrade JI, Hurtado EA, Carreño-Mendoza AL, Vivanco-Mackie HW (2020) Antimüllerian激素水平的测定及其与成年婆罗门女性卵泡数和卵巢大小的关系。动物科学研究4(1):dx.doi.org/10.16966/2576- 6457.133

版权:©2020 Macías-Andrade JI，等。这是一篇开放获取的文章，在知识共享署名许可协议的条款下发布，该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制，前提是注明原作者和来源。

出版的历史:

  • 收到日期:08年1月,2020年

  • 接受日期:04年2月,2020年

  • 发表日期:2020年2月11日(