图1:进入岛上的野猪密度(动物数量)用不同的红色表示;蓝色的是WB感染区域，黑色的是采集样本的区域。
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斯特凡诺Cappai1 *古丽亚娜桑娜2Federica定律1Annamaria Coccollone1埃琳娜Marrocu1安娜莉莎Oggiano3.迭戈Brundu2Rolesu桑德罗1尼奥•Bandino2
1 Osservatorio epidemiico Regionale, Centro di Sorveglianza流行病学，via XX Settembre 9, 20126，卡利亚里，意大利2 Istituto Zooprofilattico sperimentale della Sardegna, Via Kennedy 208100 Nuoro，意大利
3. Istituto Zooprofilattico sperimentale della Sardegna, Via Vienna, Sassari，意大利
*通讯作者:斯特凡诺·卡帕伊，意大利卡利亚里，索维里安扎流行病学中心，通过XX Settembre 9, 20126，意大利，卡利亚里，电子邮件:stefano.cappai@izs-sardegna.it
非洲猪瘟(ASF)是影响猪的最重要和最复杂的传染病之一(Susscrofa）.疾病传播代价高昂，并导致出口损失。无症状带病猪非法繁殖以及在缺乏生物安全的情况下牲畜与野猪(WB)之间的接触是导致非洲猪瘟在意大利撒丁岛许多地区持续存在的主要风险因素，该地区自1978年以来一直存在该疾病。撒丁岛地区当局实施了重要的公共卫生方案，其特点是采取有力措施消除放养猪和鼓励适当做法。在减少非洲猪瘟爆发次数和流行率方面取得了令人满意的结果。然而，关键点仍然存在，如获得诊断结果所需的时间长度，以检测在狩猎季节杀死的WB非洲猪瘟。在对能够降低成本和人力的商业血清学试剂盒测试进行现场评估后，对抗原进行Pen-Side (INGENASA)评估©) (PS)试剂盒试验，评估未来联合使用的前景。获得了2016/2017和2017/2018赛季狩猎的WB样本。在捕获后立即用PS试剂盒对400只动物进行了检测，并采集了血液进行病毒学分析，以筛查非洲猪瘟病毒。PS测试的敏感性(76.5%)和特异性(98%)高于该设备的初步结果。使用PS测试可以快速诊断和减少不必要的胴体破坏。作者建议，在非洲猪瘟范围内(同时)利用联合独立检测和对结果进行解释的战略，是在紧急情况下，特别是在疾病根除的最后阶段进行定期监测的有用工具。
非洲猪瘟;现场测试;抗原;风险;多重态;贝叶斯潜在类分析
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种家畜和野生猪[1]的传染病，该病毒是Asfarviridae[2]科Asfivirus属的dsDNA病毒。非洲猪瘟的特点是高传染性和高死亡率，涉及范围广泛的综合征，从轻微疾病到致命的出血热[3]。ASFV也在鸟食虫软蜱中复制，然后作为病毒库，在非洲和伊比利亚Paenisula[4]的危险因素中扮演重要角色。在欧洲，非洲猪瘟最早出现在葡萄牙(1957年)，随后传播到西班牙等其他国家，最终被根除。目前，该病在撒哈拉以南国家和撒丁岛(意大利)流行，造成严重的经济和社会损害[5,6]。非洲猪瘟于2007年横贯大陆蔓延至格鲁吉亚和东欧，现在分布在俄罗斯联邦、乌克兰、波兰、拉脱维亚、立陶宛、爱沙尼亚、摩尔多瓦、捷克共和国、白俄罗斯、匈牙利和罗马尼亚。在该地区，与疣猪参与森林循环的非洲疫情情况不同，野猪(WB)在疾病维持中发挥着重要作用[3,8]。经济后果，特别是由于出口限制，强调了执行非洲猪瘟活动和根除计划的重要性。尽管在诊断[9,10]和ASF免疫研究方面取得了很大进展，但目前还没有疫苗或治疗方案可以预防或限制感染[11]。目前的这种缺乏增加了鉴别非洲猪瘟实验室诊断对援助根除计划的重要性。 In Sardinia, the disease has been present since 1978, and the epidemiological situation is influenced by factors, such as the illegal free ranging of pigs in WB territories [12,13]. The incidence of ASF increased from 2011 to 2014, when the disease spread swiftly into territories outside the endemic area [5]. The implementation of Public Health programs is essential for controlling the disease. A new Plan of Eradication for ASF 2015-2018 ((PEASF-15-18) Regional Decree Number 50/17, 16 December 2014) was developed by the Sardinian Region Authority, in accordance with the European Commission. The plan established specific serological and virological measures in terms of screening activity, suspicion of disease, and slaughter for self-consumption. The surveillance plan for wildlife is geographically limited to those areas in which outbreaks of ASF occur in WB. This area is defined as the “infected zone” (IZ), and surveillance activities within this zone are different from those of the remaining Sardinian territory. Control and management of the hunting season is another important goal of the plan, and includes the application of strong rules involving carcass checks and workmanship of the meat. A significant decrease in disease prevalence, both in virological and serologic prevalence, has been observed inside and outside the IZ since the application of PE-ASF-15-18 (Table 1). One of the final steps in the eradication program is the facilitation of early detection of ASF, by not only veterinarians and the authorities, but also by hunters and farmers. As previously demonstrated [14,15], the use of a field test on both WB and illegal free-ranging pigs can be a valuable tool with economic and time saving benefits. Experimental detection of ASFV-specific antibodies was first performed by Perez, et al. [16] from experimentally infected pigs, and the Pen-Side (PS) test met the sensitivity (SE) and specificity (SP) parameters (SE=99%; SP=100%) set by the World Organization for Animal Health. In 2016, Sastre, et al. [17] evaluated the performance of the PS test on field samples obtained from outbreaks in EU countries and surveillance programs. The validation of antibody testing in the field was then carried out by Cappai, et al. [14] using samples from a high ASF risk zone, where illegal pigs and WB live closely together. WB were tested with the PS test and an ELISA or immunoperoxidase monolayer assay (IPMA). On ROC curve analysis, the test was defined as moderately accurate, based on Swets agreement [18] (SE=81.8%; SP=95.9%; positive predictive value (PPV)=69.3%; negative predictive value (NPV)=97.9%). These studies confirm that the PS test offers advantage and benefits, especially in field scenario, as a rapid, economic, and simple-to-use tool with a high SP. To our knowledge, no study has been performed to evaluate the performance of the PS test for antigen detection. The aim of this work was evaluate the use of the PS test for antigen detection of ASFV in the field, and to assess any potential difficulties related to test execution. In addition to performing the PS test in 400 WB, a questionnaire was completed for each test.
| 受感染的区域(子) | 未感染区(NZI) | |||||||||
| 狩猎 季节 |
WB狩猎数 | 世行病毒测试 | 病毒pos | 病毒: | 世行血清检测 | pos | 上一页 | 世行血清检测 | pos | 上一页 |
| 2010/11 | 1596 | 626 | 0 | 0．00 | 754 | 16 | 2．12 | 785 | 0 | 0．00 |
| 2011/12 | 7775 | 3383 | 25 | 0.74 | 3817 | 143 | 3．75 | 3693 | 23 | 0.62 |
| 2012/13 | 6224 | 2363 | 11 | ０．４７ | 3256 | 340 | 10.44 | 2759 | 13 | ０．４７ |
| 2013/14 | 10419 | 2047 | 40 | 1.95 | 3431 | 269 | 7．84 | 4405 | 2 | 0．05 |
| 2014/15 | 11361 | 1479 | 9 | 0.61 | 3676 | 271 | 7.37 | 3947 | 8 | 0．20 |
| 2015/16 | 12734 | 2859 | 13 | 0.45 | 3549 | 240 | 6.76 | 6621 | 5 | 0．08 |
| 2016/17 | 15673 | 4106 | 39 | 0.95 | 4898 | 230 | 4.70 | 5354 | 7 | 0．13 |
| 2017/18 | 12561 | 5172 | 24 | 0.46 | 5177 | 198 | 3.82 | 5112 | 5 | 0．10 |
表1:在每个狩猎年控制的总WB和相对血清和病毒流行(prev.)在感染区(ZI)和非感染区(NZI)。
动物采样
该研究使用了2016/2017和2017/2018狩猎季节(CVC)的WB采集的样本(图1)。CVC的时间范围为11月1日至1月31日，与PE-ASF-15-18一致。根据Ingenasa的建议，由经验丰富的兽医在最大死后5小时内采集样本。兽医为每个样本编制数据，包括关于WB性别和年龄、狩猎地理坐标、气候条件、PS测试存储和测试执行方法的信息。此外，利用狩猎地理定位信息对空间分布进行评估，以保证狩猎地点的随机选择。使用PS (INGENASA)进行测试©)进行抗原检测，Real Time PCR作为金标准。关于WB样本数据收集以及PS和PCR检测结果的信息存储在一个特定的密码保护的Microsoft Office Access数据库中，如表2所示。通过大量的数据检查来验证数据的一致性和准确性，并对任何不一致进行评估和纠正。
| 变量 | 描述 | 缩写 | 类别 |
| x1 | 数量的直辖市 | 市 | 狩猎 |
| x2 | 狩猎公司数量 | 狩猎公司 | 狩猎 |
| x3. | 狩猎天数 | 狩猎的日子 | 狩猎 |
| x4 | 纬度 | 纬度 | 狩猎 |
| x5 | 经度 | 长 | 狩猎 |
| x6 | 性别(女性/男性) | 性 | 野猪 |
| x7 | 被猎杀动物的时代 | 年龄 | 野猪 |
| x8 | 在笔侧测试执行前通知狩猎公司的时间(小时) | 项通知时间 | 狩猎 |
| x9 | 与撤离活动组织有关的时间通知是否恰当(是/否) | 项B-notice足够 | 狩猎 |
| x10 | 到达撤退活动地点所需距离(公里) | 项目c1 -距离测试地点 | 测试条件 |
| x11 | 到达提货活动地点所需时间(小时) | 项目c2 -到试验地点的时间(小时) | 测试条件 |
| x12 | 笔侧测试保存(是/不是) | 项目d笔侧测试保存 | 测试条件 |
| x13 | 笔侧测试执行地点(狩猎公司技术室、部分庇护所、露天场地、汽车) | e项测试执行地点 | 测试条件 |
| x14 | 测试提交的任何温度变化(是/不是) | 项目f测试温度变化 | 测试条件 |
| x15 | 测试执行期间记录的温度(°C) | 项目g测试执行温度 | 测试条件 |
| x16 | 气象条件(晴天、干燥、潮湿、下雨、 雷暴、雪) |
项H-meteorological条件 | 测试条件 |
| x17 | 笔侧试验用样品质量(良好、充分、不充分) | 项目质量进行抽样 | 测试结果 |
| x18 | 从提取样本到执行笔侧测试所花费的时间(小时) | j项内脏处理安全 | 测试结果 |
| x19 | 内脏处置安全评价(是/否/未验证) | 项目从退出到测试的k -时间 | 野猪 |
| x20. | 对手写测试执行的全局评估(充分的、有问题的充分的、不充分的) | 项目l -充分的测试执行 | 测试结果 |
| x21 | 猎人行为(合作/不合作) | 项M-hunter行为 | 狩猎 |
| x22 | 是否在其他狩猎公司进行检查(是否) | 在其他狩猎公司进行n项检验 | 狩猎 |
| x23 | 笔侧检测结果(阳性/阴性) | 现场测试试验结果 | 测试结果 |
| x24 | 实时PCRtest结果(阳性/阴性) | 实时PCRtest结果 | 测试结果 |
表2:用于评估围栏测试性能的变量列表，涉及狩猎、野猪、围栏测试执行条件和围栏测试结果。
测试程序
PS试验是一种用于检测血液中ASFV的免疫层析方法。血液样本必须是新鲜的，试剂需要储存在4到25°C之间。在检测膜上，检测系和对照系分别由一种针对ASFV的单克隆抗体和一种对照蛋白组成。控制是非常重要的，表明测试已经正确执行。为了进行测试，将20微升的全血放入圆形窗口，并加入3到4滴流动缓冲液。结果在十分钟后被解释。一条蓝线表示阴性结果，一条蓝线和一条黑线表示阳性结果。如果蓝线在10分钟内没有出现，则认为测试无效。
统计分析
进行描述性分析来评估所有收集变量的基线分布，并选择与测试之间的一致性/不一致性相关的可能因素，然后在分层分析中进一步评估。WB年龄用中位数(I-III四分位数)和最小-最大值表示，分类变量用频率和百分比表示。新诊断试验的准确性(即SE和SP)通常与已建立的金标准[19]进行比较。如果在评估新的诊断试验时忽略金标准的错误率，并认为金标准是完美的(100% SE和100% SP)，则新试验的准确性和疾病流行率可能会被低估[20]。虽然PCR检测目前被认为是Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Sardegna (IZS-Sardegna)实验室的金标准，具有极好的准确性，但其SE和SP并非100%。1995年，Joseph等人[21]提出使用贝叶斯潜在类模型(lcm)作为一种方法来估计诊断检验的准确性时，黄金标准的准确性是未知的或小于100%。贝叶斯LCMs越来越多地被用于评估诊断测试的准确性，最近的研究表明，当金标准测试的SEs较低时，贝叶斯LCMs可以用来估计替代诊断测试的真实准确性[22-24]。基于这些前提，我们决定用两种统计方法来分析收集的数据:分析经验(非参数)接收者工作特征(ROC)曲线[25]和贝叶斯lcm。曲线下面积(AUC)被广泛认为是诊断测试的鉴别能力的衡量标准，并使用梯形规则计算。然后使用Wald检验比较曲线[26]。 The graph of agreement charts (Figure 2) has been used as a valid alternative to the ROC curve graph for diagnostic tests, as explained by Bangdiwala, et al. [27]. The Bayesian LCM estimates accuracies of diagnostic tests and does not assume that any test is perfect. Rather, it considers that each test could be imperfect in diagnosing the true disease status. The true disease status of the patient population is then defined on the basis of overall prevalence. The model is then iterated using the Markov chain Monte Carlo (MCMC) method to estimate all unknown parameters, including prevalence and accuracy of each diagnostic test, and their 95% credible intervals [28]. Furthermore, Bayesian LCMs need to estimate true disease prevalence, and a 2 × 2 summary table of two diagnostic tests applied to one population does not provide enough data for this calculation [21,29]. Therefore, the Bayesian LCM analysis was performed by dividing the single WB population data set into multiple population data sets based on specific variables, such as sex and age, as suggested by Toft, et al. [30]. The Bayesian LCM was validated by checking for convergence of the Markov chains and fitness of the model used, as suggested by Lunn, et al. [31]. The final SE and SP were calculated using the OIE Real Time PCR as the gold standard, and the concordance of each test was evaluated using Kappa Coefficient (k). In order to assess the role of each variable related to concordance between diagnostic tests, a multivariable analysis of the factors listed in table 2 contributing to concordance between the PS test and PCR was conducted using a logistic multilevel mixed model (Equation (1)), with dichotomous outcome (concordance: yes/no). This model was chosen due to the fact that the logistic regression model is used to analyse the relationship between a dichotomous dependent variable and one or more independent variables. When the dependent variable is dichotomous, as in our case, the theoretical reference distribution should be the binomial distribution, rather than the normal distribution. In these cases, although it is equally possible to apply the simple regression model, a nonlinear model would be more appropriate. After careful consideration of several potentially relevant predictors, as well as both experimental and statistical requirements (such as non-collinearity), we evaluated the variables reported in table 2 as potential covariates in our modelling analyses. Multicollinearity between variables was tested, since even when ordinary least squares assumptions are not violated, the estimation is still unbiased [32]. First, correlation coefficients between variables were calculated using Spearman nonparametric correlation coefficients. The choice of variables to be included in the final model was made on the basis of Wald’s test for statistically significant results. The logistic multilevel mixed model results are presented as Adjusted Odds Ratios (OR邻接的)用logistic回归方法[33]计算，该方法考虑了分析中包含的所有附加变量的影响。所有的统计测试都是双面的p值< 0.05被认为是重要的。ROC曲线分析采用STATA 13.1软件进行(STATA统计软件:Release 13, StataCorp。2013年，大学城，美国TX)。Bayesian LCM推论是基于20000次迭代收敛后的50000次迭代。后验估计分布的结果用中值和可信区间进行总结。使用R版本3.4.3、R到WinBUGS应用程序版本2.1.16和WinBUGS版本1.4.3 (Cambridge, UK)处理贝叶斯统计[34,35]。
图2:诊断性PS测试的最终结果以一致性图的方式呈现。
如表3所示，共涉及27个不同城市的58家狩猎公司，所有样本都是在38个狩猎日期间采集的。采用PS和Real Time PCR对400只WB进行检测，其中雌性182只，雄性218只。通过对动物牙齿分析确定每个WB的年龄，大部分在30月龄以上。81.8%(324名)的兽医认为狩猎公司在PS测试执行前给予的平均通知时间为0.85小时(标准差(SD)=0.22小时)是足够的。到达采集活动地点的距离中值约为5 km (I-III四分位数= 4-12 km)，平均耗时约为17 min (SD=0.35 min)。所有的PS测试(400,100%)都保存完好，没有发生突然的温度变化，大部分是在一家狩猎公司的技术室内进行的(285,71.2%)。PS测试执行期间记录的平均温度为17.7°C (SD=4.5°C)，阳光和干燥是最常见的气象条件(288,72%)。从样本收集到PS测试执行，平均时间为2小时。73.3%的样本(173个)的质量被定义为良好，然而很少有内脏处理的事件被检查(未证实= 31478.5%)。测试执行主要定义为充分(281,70.3%)。325家(81.2%)狩猎公司表示愿意，75家(18.8%)表示不愿意，324家(81%)其他狩猎公司表示愿意进行调查。 As reported in table 4, 44 Real Time PCR tests were positive and 356 Real Time PCR tests negative for ASFV, while 35 PS tests were positive and 365 PS tests negative. Based on ROC analysis (AUC=0.82, standard error (SE)=0.036, 95% CI [0.749-0.892], p <0.05), the PS test was moderately accurate (SE=65.9%, 95% CI [50.0- 79.1]; SP=98.3%, 95% CI [96.2-99.3]; positive predictive value=82.8%, 95% CI [65.7-92.8]; and negative predictive value =95.9%, 95% CI [93.2-97.6] Sweets, 1988). The Bayesian LCM was applied for the two populations of young (0-6 and 6-18 months old) and old (18-30 and >30 months old) WB tested. Tables 5a and 5b describe the PS and Real Time PCR test results in the contingency table used to perform the Bayesian analysis. Setting Real Time PCR as the perfect gold standard and using non-informative prior Beta (0.5, 0.5) distribution for Real Time PCR test’s SE and SP, the PS test detected 85.9% of true positives (PPV=85.9%, 95% CI [70.3-96.4]) and 97.4% of true negatives (NPV=97%, 95% CI [95.0-99.3]), with SE =76.5 (95% CI=59.0-92.1) and SP=98.6 (95% CI=96.9-99.7). As described by Berger, et al. [36], Bayesian LCM result estimates are reliable only when the chains in the Bayesian LCM converge properly. If the two chains do not converge, the parameters estimated by the model are unreliable. As shown in figure 3, the SE and SP chains converge, and the frequencies predicted by the Bayesian LCM fit with the observed data. Therefore, it is possible to affirm the goodness of the model’s fit. Furthermore, the goodness of fit for the Bayesian LCM should be evaluated based on agreement between “frequency observed” and “frequency predicted” using Bayesian p-value and posterior predictive distribution of each profile. The Bayesianp-value是贝叶斯模型复制数据(预测频率)比观测数据更极端的概率。接近0或1的贝叶斯p值表明，如果模型是真实的，则观测结果不太可能在数据复制中看到。这意味着当贝叶斯p-值接近或恰好为0.5，贝叶斯模型很好地描述了观测数据。预测的频率值应与观测的频率值接近。表6显示了通过贝叶斯LCM得到的年轻人和老年人的p值。因为所有的p-值等于或接近0.5，这肯定了最终模型的良好适应度。图3a-h为预测频率的预测后验分布直方图，红线为各测试结果剖面的观测频率。在每个图中，假设模型成立，复制数据集20000次，只选择2000次(thin sampling =10)来评估观察频率的概率。最后，在抽样过程中收集的所有变量作为可能的解释变量进行评估，以发现与诊断检验不一致相关的任何因素。多水平logistic模型结果如表7所示，包含四个解释变量:e项测试执行地点(露天场地、狩猎公司技术室、部分庇护所或汽车);项目i -样品质量(良好、充分或不充分);项目j采集到测试之间的时间(小时);项目l -适当的测试执行(是或有问题但适当);和道具m猎人行为(合作或非合作)，排除所有统计上不显著的行为。对所有可能的变量之间的交互进行了评估，没有发现有统计学意义的交互项。 The results obtained by multivariable analyses performed to explore the variation of the effect size for the considered factors on diagnostic tests concordance highlighted that the performance of the test in a safe place, such as the hunting company technical room, improved the concordance in contrast to the execution in the open field with statistical significance (OR邻接的=9.423 [95% ci =3.645- 24.361]，p< 0.0001)。与低质量的样本(OR)相比，质量好的样本在测试之间一致性的概率增加了三倍邻接的= 2.975 (95% CI = 1.602 - -5.527),p= 0.001)。在样本收集和PS测试执行之间的时间跨度增加被认为是一个重要的风险因素，分析证实，当时间超过一小时(OR)时，它倾向于妨碍测试之间的一致性30%邻接的=0.702 [95% ci =0.583- 0.859]，p< 0.0001)。兽医评价为适当的一般试验执行条件将Real Time PCR和PS试验的一致性提高了约5倍(OR = 5.217 [95% CI=2.049 -13.291]，p= 0.001)。此外，狩猎公司与兽医的合作使一致性提高了10倍(OR)邻接的=10.425 [95% ci =4.041-26.898]，p<0.0001)，结果具有统计学意义。
图3:输出贝叶斯LCM模型在抗原检测PS试验中的敏感性和特异性。
变量 |
(min-max)意味着(SD);n (%); |
市 |
n = 27 |
狩猎公司 |
n = 58 |
狩猎的日子 |
n = 30 |
纬度 |
8、881531 - 9、72585 |
经度 |
40, 193249 - 648545 |
性 |
218例(54.5%) |
年龄 |
33 (8.2%) |
a项通知时间(小时) |
0.85 (0.22) |
项B-notice足够 |
324例(81.8%) |
项目1-距离试验场(公里) |
5 (4 - 12) |
项目c2 -到达测试地点的时间(分钟) |
17 (0.35) |
项目d笔侧测试保存 |
400例(100%) |
e项测试执行地点 |
285例(71.2%) |
项目f测试温度变化 |
0 (0%) |
G-test执行温度(°C) |
17.7 (4.5) |
项H-meteorological条件 |
288例(72%) |
项目质量进行抽样 |
173例(43.3%) |
项目J-ti退出与测试之间(小时) |
2 (0.1 - 3) |
物品k内脏处理安全 |
78例(19.5%) |
项目l -充分的测试执行 |
281例(70.3%) |
项M-hunter行为 |
325例(81.2%) |
在其他狩猎公司进行n项检验 |
324例(81%) |
表3:围栏测试性能评估中涉及的所有变量的基线描述，涉及狩猎、野猪、围栏测试执行条件和围栏测试结果，表示为中位数(中位数)和四分位数(I-III四分位数)、频率(n)和百分比(%)、最小-最大值。
| 诊断测试 结果 |
实时聚合酶链反应 积极的 |
实时聚合酶链反应 负 |
总计 |
| 现场测试的积极 | 29 (82.8%) | 6 (17.2%) | 35 |
| 现场测试负 | 15 (4.1%) | 350例(95.9%) | 365 |
| 总计 | 44 | 356 | 400 |
表4:将基于pen side (PS)试验的列联表与非洲猪瘟的Real Time PCR试验进行比较，获得发生假阳性和假阴性的指示，用于拟合接收者操作特征曲线。
| 诊断测试结果 | 实时聚合酶链反应积极的 | 实时聚合酶链反应负 | 总计 |
| 现场测试的积极 | 16 (%) | 1 (%) | 17 |
| 现场测试负 | 8 (%) | 91 (%) | 99 |
| 总计 | 24 | 92 | 116 |
表5:基于penside (PS)试验的年轻(0-6个月和6-18个月)WB群体列联表，并与非洲猪瘟的Real Time PCR试验进行比较，以获得发生假阳性和假阴性的指示，用于拟合贝叶斯潜伏类模型。
| 诊断测试结果 | 实时聚合酶链反应积极的 | 实时聚合酶链反应负 | 总计 |
| 现场测试的积极 | 13 (%) | 5 (%) | 18 |
| 现场测试负 | 7 (%) | 259 (%) | 266 |
| 总计 | 20. | 264 | 284 |
表5 b:基于penside (PS)试验的老龄(18-30个月和>30个月)WB人群列联表，并与非洲猪瘟的Real Time PCR试验进行比较，以获得假阳性和假阴性发生的指示，用于拟合贝叶斯潜伏类模型。
| 诊断测试结果 | 现场测试 | 实时聚合酶链反应 | 观察到的 | 预测 | 贝叶斯假设机率 |
| 年轻的白平衡人口 | 积极的 | 积极的 | 16 | 16 | 0.547 |
| 积极的 | 负 | 1 | 1 | 0.499 | |
| 负 | 积极的 | 8 | 7 | 0.396 | |
| 负 | 负 | 91 | 91 | 0.515 | |
| 年轻的白平衡人口 | 积极的 | 积极的 | 13 | 12 | 0.463 |
| 积极的 | 负 | 5 | 4 | 0.437 | |
| 负 | 积极的 | 7 | 8 | 0.537 | |
| 负 | 负 | 259 | 258 | 0.493 |
表6:使用贝叶斯LCM p值和每个剖面的后验预测分布的“频率观测”和“频率预测”之间的一致性。
变量 |
或邻接的(95%置信区间) |
假定值 |
e项测试执行地点 |
|
|
项目质量进行抽样 |
2.975 (1.602 - -5.527) |
０．００１ |
项目j提取至测试时间(小时) |
0.702 (0.583 - -0.859) |
< 0.0001 |
项目l -充分的测试执行 |
5.217 (2.049 - -13.291) |
０．００１ |
项M-hunter行为 |
10.425 (4.041 - -26.898) |
< 0.0001 |
T能7:logistic多水平回归模型的结果使用钢笔侧检验和实时PCRtest之间的一致性作为结果，包括统计上显著的解释变量。结果报告为调整优势比(ORadj)， 95%置信区间(95% CI)， p值。
本研究的目的是在现场验证PS检测ASFV抗原的有效性。与Real Time PCR试验相比，PS试验在SE和SP方面的效率定义为中等精度。用于验证的大量样本也提供了撒丁岛非洲猪瘟实际情况的概述，并加强了所获得的结果。在流行非洲猪瘟的地区，如撒丁岛地区，早期发现该病是根除方案的基本要求。正如之前Cappai等人[14]所证明的，获得WB样本实验室结果所花费的时间是非洲猪瘟暴发和疾病传播增加的一个风险因素。使用具有快速反应能力的诊断设备对于监测和根除白毛猪与放养猪接触地区的疾病至关重要。SP检测结果表明，该检测对诊断WB为ASFV阴性具有重要作用。根除计划提供的声明规定，在隔离区内，所有捕获的WB必须提交以进行血清学和病毒学检测。在测试结果完成之前，必须对所有WB胴体进行保护。使用直接在现场进行的快速测试可以减少这种等待时间。 In fact, animals diagnosed as negative on a test with a high SP could be immediately released for consumption, allowing for a gain in time and money. In cases of positive results, measures and restrictions can be adopted immediately. However, the situation in field application could be improved considerably through the use of multiple tests (PS antigen and PS antibody) applied under a parallel test interpretation, since independent tests assess different indicators of disease [37]. The aim of using both tests in this study was to enhance the operational effectiveness of the control activities and to identify areas where further investigation is needed. The variables considered for each WB tested, those linked to test operation, and those connected to company cooperation are strictly correlated with good test results. These results support the use of this test only by trained and prepared operators. This aspect should be considered in order to achieve the test objective and to ensure the feasibility of the project in terms of cost, since most of the testing is carried out during the hunting season. A complete change in the management of disease testing during the hunting season in the future would be desirable, with operators distributed around the territory to guarantee the control and testing of the carcasses on the day of hunting, even on holidays, using the PS test.
作者声明没有利益冲突。
这项研究是由卫生部资助的萨登尼亚动物研究所(Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Sardegna)研究项目(IZS SA 07/16 RC)的一部分。作者感谢ASSL兽医在野猪取样期间的合作和与狩猎公司的关系。
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文章类型:研究文章
引用:(2018)非洲猪瘟抗原快速试剂盒的现场检测。动物科学研究2(3):dx.doi.org/10.16966/2576-6457.118
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